發(fā)布時間：2022-12-09 02:06

　　由新月彎孢菌（Curvularia lunata（Walk）Boed.）侵染引起的彎孢葉斑病是一種重要玉米葉部病害。目前對于玉米彎孢葉斑病菌致病力的研究主要集中在毒素、黑色素及細(xì)胞壁降解酶等方面,已有研究表明鐵離子是植物病原真菌保持致病力的必要條件。因此本文以玉米彎孢葉斑病菌為研究對象,通過分析鐵載體吸收途徑（Siderophore absorption,SIA）中鐵載體生物合成關(guān)鍵酶基因—非核糖體肽合成酶6（Nonribosomal peptide synthetases 6,NPS6）和還原性鐵吸收途徑（Reduced iron absorption,RIA）中轉(zhuǎn)運關(guān)鍵酶基因—鐵通透酶（Fe transporter permease,Ftr1）的作用,明確其對玉米彎孢葉斑病菌致病力的影響,并通過轉(zhuǎn)錄組學(xué)方法,明確ClNPS6和ClFtr1調(diào)控玉米彎孢葉斑病菌致病力機理,為進一步豐富玉米彎孢葉斑病菌致病分子機制奠定基礎(chǔ)。取得的主要結(jié)果如下:1.明確非核糖體肽合成酶（NRPS）基因?qū)τ衩讖濇呷~斑病菌致病力的影響。采用生物信息學(xué)方法確定玉米彎孢葉斑病菌中含有6個NRPS基因,分別為ClN... 

【文章頁數(shù)】：129 頁

【學(xué)位級別】：博士

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前言
第一章 玉米彎孢葉斑病菌致病機制與植物病原真菌鐵離子代謝研究進展
    1.1 玉米彎孢葉斑病菌致病機制研究進展
    1.2 植物病原菌鐵離子代謝研究進展
    1.3 鐵離子調(diào)控植物病原真菌致病力研究進展
第二章 非核糖體肽合成酶(NRPS)基因?qū)τ衩讖濇呷~斑病菌致病力影響
    第一節(jié) 玉米彎孢葉斑病菌NRPS生物信息學(xué)分析
        2.1 材料與方法
        2.2 結(jié)果與分析
            2.2.1 核苷酸序列獲得
            2.2.2 ORF分析
            2.2.3 理化性質(zhì)分析
            2.2.4 蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)分析
            2.2.5 亞細(xì)胞定位預(yù)測
            2.2.6 蛋白功能結(jié)構(gòu)域分析
            2.2.7 NRPS結(jié)構(gòu)預(yù)測
            2.2.8 ClNRPS進化分析
        2.3 小結(jié)
    第二節(jié) 玉米彎孢葉斑病菌非核糖體肽合成酶基因敲除載體構(gòu)建
        2.1 材料與方法
        2.2 結(jié)果與分析
            2.2.1 側(cè)翼片段的獲得
            2.2.2 敲除載體構(gòu)建與驗證
            2.2.3 敲除載體轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌PCR驗證
        2.3 小結(jié)
    第三節(jié) 玉米彎孢葉斑病菌非核糖肽合成酶基因突變體致病力檢測
        2.1 材料與方法
        2.2 結(jié)果與分析
            2.2.1 ClNRPS突變體的獲得
            2.2.2 ClNRPS突變體致病力測定
        2.3 小結(jié)
第三章 鐵離子對玉米彎孢葉斑病菌生長發(fā)育的影響
    3.1 材料和方法
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 鐵離子對C.lunata生長的影響
        3.2.2 鐵離子對C.lunata分生孢子產(chǎn)生,萌發(fā)和芽管長度的影響
        3.2.3 鐵離子對C.lunata致病力的影響
        3.2.4 鐵離子對C.lunata毒素的影響
        3.2.5 鐵離子對離、活體細(xì)胞壁降解酶活性的影響
    3.3 小結(jié)
第四章 鐵載體(SIA)和還原鐵(RIA)吸收途徑中關(guān)鍵酶基因克隆及功能分析
    第一節(jié) ClNPS6和ClFtr1基因敲除及互補載體構(gòu)建
        4.1 材料與方法
        4.2 結(jié)果與分析
            4.2.1 玉米葉片鐵離子含量測定
            4.2.2 不同鐵離子濃度條件下ClNPS6和ClFtr1的表達(dá)
            4.2.3 ClNPS6和ClFtr1同源性分析
            4.2.4 5'端與3'端側(cè)翼片段的獲得
            4.2.5 側(cè)翼片段與雙元載體連接
            4.2.6 農(nóng)桿菌PCR驗證
        4.3 小結(jié)
    第二節(jié) ClNPS6和ClFtr1功能分析
        4.1 材料與方法
        4.2 結(jié)果與分析
            4.2.1 突變體獲得
            4.2.2 鐵載體鑒定
            4.2.3 生長速率測定
            4.2.4 產(chǎn)孢量測定
            4.2.5 附著胞測定
            4.2.6 子囊及子囊孢子測定
            4.2.7 敏感性測定
            4.2.8 致病力測定
        4.3 小結(jié)
    第三節(jié) 鐵載體途徑(SIA)轉(zhuǎn)運蛋白基因克隆及功能分析
        4.1 材料與方法
        4.2 結(jié)果與分析
            4.2.1 轉(zhuǎn)運蛋白基因表達(dá)檢測
            4.2.2 敲除載體構(gòu)建
            4.2.3 突變體獲得
            4.2.4 突變體生長速率測定
            4.2.5 突變體產(chǎn)孢量及孢子萌發(fā)測定
            4.2.6 突變體附著胞產(chǎn)生測定
            4.2.7 突變體致病力測定
        4.3 小結(jié)
第五章 ClFtr1和ClNPS6調(diào)控玉米彎孢葉斑病菌致病力分子機制
    第一節(jié) 轉(zhuǎn)錄水平分析ClFtr1和ClNPS6的調(diào)控作用
        5.1 材料與方法
        5.2 結(jié)果與分析
            5.2.1 測序結(jié)果
            5.1.2 新基因分析
            5.1.3 下調(diào)差異表達(dá)基因篩選及聚類分析
            5.1.4 qRT-PCR驗證結(jié)果
        5.3 小結(jié)
    第二節(jié) ClFtr1和ClNPS6調(diào)控玉米彎孢葉斑病菌致病力分子機制
        5.1 材料與方法
        5.2 結(jié)果與分析
            5.2.1 侵染過程中ClNPS6和ClFtr1表達(dá)
            5.2.2 侵染過程組織學(xué)觀察
            5.2.3 侵染過程中ClNPS6和ClFtr1對致病因子相關(guān)基因表達(dá)的影響
        5.3 小結(jié)
第六章 結(jié)論與討論
    6.1 結(jié)論
    6.2 有待進一步研究之處
    6.3 論文創(chuàng)新點
參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]玉米彎孢菌黑色素性質(zhì)及其在致病性中的作用研究[J]. 王曉飛,薛春生,徐書法,劉力行,陳捷.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2007(21)
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[6]馬唐生防菌畫眉草彎孢霉毒素α,-βdehydro-curvularin對馬唐葉綠體功能的影響[J]. 姜述君,強勝.  植物病理學(xué)報. 2005(04)
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碩士論文
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[2]玉米彎孢霉葉斑病菌Clm1基因的克隆與功能分析[D]. 王嘉淵.上海交通大學(xué) 2011
[3]玉米彎孢霉葉斑病菌Clk1基因的克隆與功能分析[D]. 周斐紅.上海交通大學(xué) 2010
[4]玉米與新月彎孢菌互作的組織病理學(xué)研究[D]. 王蘭.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2002
[5]玉米彎孢葉斑病的初侵染源、病菌生物學(xué)特性及種質(zhì)資源抗性評價的研究[D]. 李富華.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2002
[6]玉米抗彎孢葉斑病的生化機制研究[D]. 黃婭琳.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2002



本文編號：3714597