多藥和有毒化合物外排（MATE）蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)次生代謝產(chǎn)物、激素和金屬離子,參與植物體內(nèi)多種生理活動。紫花苜蓿是具有較強(qiáng)的抗逆性的重要牧草作物。本研究克隆紫花苜蓿MsMATE1基因及其啟動子。構(gòu)建了植物表達(dá)載體pBI121-MsMATE1和pBI121MsMATE1pro::GUS,將pBI121-MsMATE1轉(zhuǎn)入煙草中,對MsMATE1進(jìn)行了初步的功能鑒定。取得的主要研究結(jié)果如下:1.MsMATE1基因的克隆與生物信息學(xué)分析RT-PCR方法克隆獲得MsMATE1基因。MsMATE1長1470 bp,編碼489個氨基酸,具有MatE結(jié)構(gòu)域。MsMATE1蛋白屬于疏水性蛋白,二級結(jié)構(gòu)中α螺旋（Alpha helix）和無規(guī)卷曲（Random coil）含量最多,有12個跨膜結(jié)構(gòu)域。系統(tǒng)發(fā)育分析表明,紫花苜蓿MsMATE1與蒺藜苜蓿MtMATE關(guān)系最為密切。2.MsMATE1基因的表達(dá)特性利用qRT-PCR對Ms MATE1在紫花苜蓿不同部位的相對表達(dá)量進(jìn)行檢測,結(jié)果表明MsMATE1的表達(dá)量為莖＞根＞葉,莖中MsMATE1的表達(dá)量顯著高于根和葉（P＜0.01）。高鐵和缺鐵脅迫下根、莖、葉中M... 

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 紫花苜蓿
        1.1.1 紫花苜蓿次生代謝產(chǎn)物研究進(jìn)展
        1.1.2 紫花苜蓿金屬轉(zhuǎn)運(yùn)研究進(jìn)展
        1.1.3 紫花苜蓿植物激素研究進(jìn)展
    1.2 MATE基因的研究進(jìn)展
        1.2.1 MATE轉(zhuǎn)運(yùn)次生代謝產(chǎn)物
        1.2.2 MATE轉(zhuǎn)運(yùn)金屬離子
        1.2.3 MATE參與植物激素信號傳遞
    1.3 本課題的研究目的和意義
    1.4 技術(shù)路線
第2章 紫花苜蓿(Medicago sativa)MsMATE1基因的克隆及序列分析
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.1 植物材料
        2.2.2 載體和菌株
        2.2.3 主要儀器設(shè)備
        2.2.4 主要試劑
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 紫花苜蓿總RNA提取
        2.3.2 PCR擴(kuò)增目的基因
        2.3.3 MsMATE1 基因克隆載體的構(gòu)建
        2.3.4 MsMATE1 基因的生物信息學(xué)分析
        2.3.5 qRT-PCR
        2.3.6 鐵脅迫處理紫花苜蓿
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.4.1 MsMATE1 基因的克隆
        2.4.2 pMD18T-MsMATE1 克隆載體的構(gòu)建
        2.4.3 MsMATE1 基因的生物信息學(xué)分析
        2.4.4 MsMATE1 的組織表達(dá)量分析
        2.4.5 鐵脅迫下紫花苜蓿MsMATE1 的表達(dá)量分析
    2.5 本章討論
    2.6 本章小結(jié)
第3章 紫花苜蓿MsMATE1基因啟動子克隆
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料與藥品
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)藥品
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 紫花苜�；蚪MDNA的提取
        3.3.2 PCR擴(kuò)增目的條帶
        3.3.3 基因片段的膠回收
        3.3.4 pMD18T-MsMATE1 啟動子克隆載體的構(gòu)建
        3.3.5 紫花苜蓿MsMATE1 基因啟動子生物信息學(xué)分析
        3.3.6 pBI121MsMATE1pro::GUS啟動子表達(dá)載體的構(gòu)建
    3.4 結(jié)果與分析
        3.4.1 MsMATE1 啟動子的克隆
        3.4.2 MsMATE1 基因啟動子順式作用元件分析
        3.4.3 pBI121MsMATE1pro::GUS啟動子表達(dá)載體的構(gòu)建
    3.5 本章討論
    3.6 本章小結(jié)
第4章 MsMATE1 基因?qū)煵莸倪z傳轉(zhuǎn)化
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料
        4.2.1 植物材料
        4.2.2 質(zhì)粒載體與菌株
        4.2.3 實(shí)驗(yàn)藥品及儀器
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 pBI121-MsMATE1植物表達(dá)載體的構(gòu)建
        4.3.2 pBI121-MsMATE1質(zhì)粒轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌
        4.3.3 煙草的遺傳轉(zhuǎn)化
        4.3.4 轉(zhuǎn)MsMATE1基因煙草的分子鑒定
    4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.4.1 MsMATE1基因植物表達(dá)載體的構(gòu)建
        4.4.2 pBI121-MsMATE1 轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌
        4.4.3 MsMATE1基因?qū)煵莸倪z傳轉(zhuǎn)化
        4.4.4 轉(zhuǎn)基因煙草的PCR檢測
    4.5 本章討論
    4.6 本章小結(jié)
第5章 轉(zhuǎn)MsMATE1 基因煙草的生理檢測分析
    5.1 引言
    5.2 實(shí)驗(yàn)材料及藥品
        5.2.1 植物材料
        5.2.2 實(shí)驗(yàn)藥品
    5.3 實(shí)驗(yàn)方法
        5.3.1 轉(zhuǎn)MsMATE1基因煙草的鐵脅迫
        5.3.2 轉(zhuǎn)MsMATE1基因煙草的生理指標(biāo)檢測
        5.3.3 數(shù)據(jù)處理
    5.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析
        5.4.1 葉綠素含量
        5.4.2 抗氧化酶活性指標(biāo)分析
        5.4.3 丙二醛(MDA)含量
        5.4.4 可溶性蛋白含量
    5.5 討論
    5.6 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號：3709402