家蠶絲腺是人類馴化和畜牧化飼養(yǎng)家蠶的靶組織,擁有已知昆蟲中最強(qiáng)大的合成和分泌蛋白的能力,絲腺絲腺生物反應(yīng)器也廣受業(yè)者期待。目前為止,大量的轉(zhuǎn)基因家蠶的絲腺普遍存在外源蛋白表達(dá)效率低,絲腺發(fā)育不良的現(xiàn)象。本實(shí)驗(yàn)室利用piggyBac轉(zhuǎn)座子,獲得了 2個(gè)后部絲腺高效表達(dá)絲膠蛋白（Ser3）和絲素重鏈相似蛋白（Hpl）的轉(zhuǎn)基因家蠶純系SER和TBH,SER后部絲腺發(fā)育正常,而TBH后部絲腺發(fā)育異常。本文通過絲腺組織發(fā)育和細(xì)胞結(jié)構(gòu)、調(diào)控蛋白質(zhì)合成與分泌的分子信號通路等方面的研究,比較了 SER和TBH家蠶后部絲腺發(fā)育的差異機(jī)制。主要結(jié)果如下:TBH和SER家蠶的后部絲腺細(xì)胞分別能夠高效地合成Hpl或Ser3蛋白。Ser3蛋白能夠無障礙地從腺細(xì)胞分泌至腺腔,對絲腺細(xì)胞核復(fù)制和絲腺生長沒有統(tǒng)計(jì)意義的不良影響。TBH家蠶后部絲腺的腺細(xì)胞核DNA復(fù)制速度下降,后部絲腺生長受到顯著抑制。TBH家蠶后部絲腺合成的蛋白質(zhì)分泌到腺腔量顯著減少,細(xì)胞內(nèi)中出現(xiàn)大量的蛋白小泡堆積,細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體等結(jié)構(gòu)逐漸消失,并誘導(dǎo)細(xì)胞自噬凋亡水平上調(diào)。進(jìn)一步的磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)分析結(jié)果顯示,與野生型相比,TBH家蠶后部絲腺細(xì)... 

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
ABSTRACT
1 引言
    1.1 家蠶絲腺的生長發(fā)育和退化
        1.1.1 絲腺的構(gòu)成
        1.1.2 絲腺的生長發(fā)育
        1.1.3 絲腺的退化
    1.2 家蠶絲素蛋白組成及其基因表達(dá)調(diào)控
        1.2.1 絲素蛋白的組成
        1.2.2 絲素蛋白基因表達(dá)調(diào)控
    1.3 轉(zhuǎn)基因家蠶的研究現(xiàn)狀
        1.3.1 轉(zhuǎn)基因技術(shù)
        1.3.2 轉(zhuǎn)基因家蠶研究現(xiàn)狀及展望
    1.4 論文研究思路
        1.4.1 研究目的與意義
        1.4.2 研究目標(biāo)與內(nèi)容
        1.4.3 研究技術(shù)路線
2 試驗(yàn)材料與方法
    2.1 試驗(yàn)材料
        2.1.1 蠶品種
        2.1.2 主要試劑和試劑盒
    2.2 主要儀器設(shè)備
    2.3 試驗(yàn)方法
        2.3.1 總RNA提取
        2.3.2 DNA消化
        2.3.3 RNA反轉(zhuǎn)錄
        2.3.4 實(shí)時(shí)定量PCR
        2.3.5 絲膠含量測定
        2.3.6 石蠟切片制備
        2.3.7 HE染色
        2.3.8 DAPI染色
        2.3.9 EDU檢測
        2.3.10 TUNEL染色
        2.3.11 溶酶體染色
        2.3.12 鈣離子染色
        2.3.13 透射電鏡
        2.3.14 磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)
3 結(jié)果與分析
    3.1 表達(dá)不同的外源蛋白對絲腺生長發(fā)育的影響差異
    3.2 表達(dá)不同的外源蛋白對家蠶吐絲功能的影響差異
    3.3 表達(dá)不同的外源蛋白對家蠶絲腺細(xì)胞DNA復(fù)制的影響差異
    3.4 外源蛋白在絲腺中的表達(dá)促進(jìn)絲腺細(xì)胞自噬凋亡
    3.5 外源蛋白在絲腺中的表達(dá)對絲素蛋白合成能力的影響
    3.6 外源蛋白在絲腺中的表達(dá)對后部絲腺細(xì)胞蛋白分泌的影響
    3.7 磷酸化蛋白組學(xué)分析
4 討論與結(jié)論
    4.1 未正確折疊蛋白的積累引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)
    4.2 過長的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡
    4.3 未折疊蛋白反應(yīng)通路分析
    4.4 綜合結(jié)論
參考文獻(xiàn)
在讀期間參與項(xiàng)目與科研成果
附錄
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]內(nèi)質(zhì)網(wǎng)壓力響應(yīng)相關(guān)的蛋白質(zhì)降解[J]. 閆孟節(jié),侯運(yùn)華,呂珊珊,鐘耀華.  生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展. 2016(06)
[2]家蠶Bmo-miR-2739對絲素重鏈基因Fib-H表達(dá)的調(diào)控作用[J]. 宋菲,王欣,錢平,唐順明,趙巧玲,郭錫杰,沈興家.  蠶業(yè)科學(xué). 2014(03)
[3]競爭性內(nèi)源RNA（ceRNAs）研究進(jìn)展——RNA對話的新機(jī)制[J]. 湯鋒,劉昆梅,李潤樂,奚濤.  中國藥科大學(xué)學(xué)報(bào). 2012(06)
[4]內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激[J]. 莊娟.  生物學(xué)教學(xué). 2012(12)
[5]Construction and detection of expression vectors of microRNA-9a in BmN cells[J]. Yong HUANG1,3,4,Quan ZOU2,Sheng-peng WANG1,3,Shun-ming TANG1,3,Guo-zheng ZHANG1,3,Xing-jia SHEN1,3 (1Key Laboratory of Silkworm and Mulberry Genetic Improvement,Ministry of Agriculture,Jiangsu University of Science and Technology,Zhenjiang 212018,China) (2School of Information Science and Technology,Xiamen University,Xiamen 361005,China) (3Sericultural Research Institute,Chinese Academy of Agricultural Sciences,Zhenjiang 212018,China) (4Animal Science and Technology College,Henan University of Science and Technology,Luoyang 471003,China).  Journal of Zhejiang University-Science B（Biomedicine ＆ Biotechnology）. 2011(07)
[6]轉(zhuǎn)基因植物檢測技術(shù)的研究進(jìn)展[J]. 郭斌,祁洋,尉亞輝.  中國生物工程雜志. 2010(02)
[7]家蠶蠶絲蛋白基因表達(dá)調(diào)控研究進(jìn)展[J]. 汪生鵬,孫霞.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2009(28)
[8]腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)ATF6、IRE1介導(dǎo)的未折疊蛋白反應(yīng)[J]. 薛欣,趙京元,張永祥.  毒理學(xué)雜志. 2008(06)
[9]新型狂犬病疫苗及其基因工程抗體的研究進(jìn)展[J]. 蔡昆,王慧.  中國生物制品學(xué)雜志. 2007(05)
[10]基因槍法轉(zhuǎn)基因技術(shù)的研究綜述[J]. 盧萍,王寶蘭.  內(nèi)蒙古師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)漢文版). 2006(01)

博士論文
[1]特異性下調(diào)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分子伴侶GRP94對人大腸癌細(xì)胞生物學(xué)特性影響的研究[D]. 陳瑤.中國醫(yī)科大學(xué) 2003



本文編號：3703477