發(fā)布時間：2022-10-11 13:53

　　本研究根據(jù)Genebank中公布的蜂毒肽（melittin）基因序列（NM001011607）,將其插入pGEX6p-1載體,轉(zhuǎn)入BL21（DE3）進行誘導(dǎo)表達并純化重組蛋白melittin,測定其濃度,采用SDS-PAGE電泳及免疫印跡分析重組蜂毒肽的分子量和活性;進行抑菌試驗,以及腫瘤細胞毒性實驗,判斷重組蜂毒肽的生物活性。重組蛋白經(jīng)SDS-PAGE和灰度分析在25～35 kDa之間出現(xiàn)一條明顯條帶;重組蛋白對金黃色葡萄球菌有高度敏性,對大腸埃希菌有中度敏感性,對銅綠假單胞菌和傷寒沙門菌有低度敏感性。5個濃度重組蛋白50、25、12.5、6.25、3.125 mg/L分別作用人乳腺癌MCF-7細胞,在12、24、36、48、72 h時間對人乳腺癌MCF-7細胞生長均有穩(wěn)定抑制作用,與對照組相比有明顯差異（P＜0.05）。蜂毒肽融合蛋白通過pGEX6p-1載體轉(zhuǎn)化到原核細胞進行表達穩(wěn)定可行,且具有明顯抑菌和抗腫瘤的作用。 

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 主要材料與試劑
    1.1 主要試劑
    1.2 試劑盒
    1.3 載體、菌種及細胞
    1.4 主要實驗設(shè)備
2 方法
    2.1 表達菌株的構(gòu)建和蛋白誘導(dǎo)條件的優(yōu)化
    2.2 pGEX6p-melittin表達純化
    2.3 SDS-PAGE電泳、蛋白濃度分析
    2.4 免疫印跡
    2.5 藥敏試驗
        2.5.1 表達蛋白液和菌懸液的制備
        2.5.2 抑菌實驗
    2.6 抗腫瘤實驗
    2.7 統(tǒng)計學(xué)處理
3 結(jié)果
    3.1 重組蛋白的表達及定位
    3.2 純化蛋白檢測、灰度分析及免疫印跡
    3.3 抑菌試驗
    3.4 抗腫瘤作用
4 討論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]蜂針療法治療寒濕型非特異性腰痛的臨床效果[J]. 倪珊,劉一暢.  中國當(dāng)代醫(yī)藥. 2020(08)
[2]抗菌肽抗菌機制及研究熱點[J]. 張溪,弓磊.  中國組織工程研究. 2020(10)
[3]大胡蜂蜂毒中多肽和蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能的多樣性[J]. 周思彤,車逸豪,倪連麗,李龍星,袁仕夢,楊自忠,楊志斌,張成桂.  天然產(chǎn)物研究與開發(fā). 2019(09)
[4]蜂毒的主要成分及藥理作用的研究進展[J]. 張冰清,劉曉波.  藥學(xué)研究. 2016(03)
[5]昆蟲抗菌肽在醫(yī)藥上的應(yīng)用[J]. 黃自然,廖富蘋,鄭青,黃亞東.  天然產(chǎn)物研究與開發(fā). 2001(02)



本文編號：3690692