昆蟲表皮碳?xì)浠衔铮–uticular hydrocarbon,CHC）是沉積在昆蟲體表的非極性長(zhǎng)鏈脂類物質(zhì)。其在維持水分平衡以及化學(xué)交流方面發(fā)揮重要作用。昆蟲CHC組成譜常表現(xiàn)出高度的物種專一性,且可受到多種內(nèi)外因素的影響而表現(xiàn)出種內(nèi)變異,其變異來源及尺度在半翅目昆蟲,尤其是具有多樣種內(nèi)多型的蚜蟲中較少被探究。昆蟲CHC是體內(nèi)合成并運(yùn)輸?shù)襟w表的產(chǎn)物,其生物合成途徑受到復(fù)雜的多基因分子調(diào)節(jié)。作為果蠅基因組所含兩個(gè)CYP4G亞家族基因之一,CYP4G1被證明參與催化CHC合成的最后一步反應(yīng)。然而,CYP4G基因在其它昆蟲包括刺吸式蚜蟲中的具體功能還不清楚。本研究以豌豆蚜（Acyrthosiphon pisum）為模式系統(tǒng),通過建立和優(yōu)化適合蚜蟲CHC提取的高效固相微萃�。⊿olid-phase microextration,SPME）技術(shù),并在此基礎(chǔ)上探究多種因素對(duì)CHC的影響,從而明確CHC種內(nèi)變異的來源和尺度;通過對(duì)豌豆蚜唯一的CYP4G亞家族基因CYP4G51進(jìn)行分子鑒定、功能研究以及真核表達(dá)和活性檢測(cè),明確了其在參與HC合成中的關(guān)鍵作用。本研究取得主要結(jié)果如下:1.基于SPME技... 

【文章頁數(shù)】：107 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 昆蟲碳?xì)浠衔?br>        1.1.1 化學(xué)組成與結(jié)構(gòu)多樣性
        1.1.2 合成途徑
        1.1.3 合成部位與運(yùn)輸
    1.2 表皮碳?xì)浠衔?br>        1.2.1 主要生物學(xué)功能
        1.2.2 種內(nèi)變異
        1.2.3 提取和檢測(cè)方法
    1.3 昆蟲P450與4G亞家族
        1.3.1 昆蟲P450概述
        1.3.2 P450與碳?xì)浠衔锖铣?br>        1.3.3 CYP4Gs研究現(xiàn)狀
    1.4 蚜蟲
    1.5 研究目的、意義及內(nèi)容
        1.5.1 研究目的及意義
        1.5.2 研究?jī)?nèi)容
第二章 豌豆蚜表皮碳?xì)浠衔锓N內(nèi)變異
    2.1 前言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 供試?yán)ハx與植物
        2.2.2 主要儀器設(shè)備
        2.2.3 線粒體COI基因變異檢測(cè)
        2.2.4 正己烷浸泡法提取豌豆蚜CHC
        2.2.5 豌豆蚜CHC的固相微萃取
        2.2.6 GC-MS分析
        2.2.7 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 五個(gè)地理種群線粒體COI基因變異檢測(cè)
        2.3.2 不同SPME纖維頭對(duì)CHC吸附效率比較
        2.3.3 SPME的可重復(fù)性及有效性
        2.3.4 不同發(fā)育階段、翅型對(duì)CHC的影響
        2.3.5 寄主植物對(duì)CHC的影響
        2.3.6 豌豆蚜CHC在不同地理種群中的變異
    2.4 討論
第三章 豌豆蚜碳?xì)浠衔锖铣赏緩疥P(guān)鍵基因CYP4G51的功能研究
    3.1 前言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 供試?yán)ハx與植物
        3.2.2 主要設(shè)備及試劑
        3.2.3 基因序列獲得與生物信息學(xué)分析
        3.2.4 耐旱性生物測(cè)定
        3.2.5 組織解剖、總RNA抽提及cDNA合成
        3.2.6 熒光定量PCR(qPCR)
        3.2.7 豌豆蚜CYP4G51基因片段的克隆
        3.2.8 dsRNA的合成
        3.2.9 dsRNA的導(dǎo)入及RNAi效率檢測(cè)
        3.2.10 碳?xì)浠衔锏奶崛∨c色譜分析
        3.2.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 CYP4G51序列分析與RNAi策略
        3.3.2 CYP4G51時(shí)空表達(dá)譜分析
        3.3.3 干旱脅迫對(duì)CYP4G51表達(dá)量的影響
        3.3.4 人工飼料誘導(dǎo)CYP4G51的上調(diào)表達(dá)與CHC的增加
        3.3.5 dsRNA介導(dǎo)的CYP4G51沉默效率檢測(cè)
        3.3.6 CYP4G51沉默對(duì)碳?xì)浠衔锖康挠绊?br>        3.3.7 CYP4G51沉默對(duì)蚜蟲耐旱性的影響
    3.4 討論
第四章 CYP4G51基因的真核表達(dá)與活性檢測(cè)
    4.1 前言
    4.2 材料與方法
        4.2.1 質(zhì)粒與菌株
        4.2.2 主要設(shè)備和試劑
        4.2.3 細(xì)胞色素P450還原酶(CPR)的抗體制備
        4.2.4 CYP4G51-CPR融合蛋白的真核表達(dá)
        4.2.5 Sf9細(xì)胞微粒體蛋白的提取
        4.2.6 P450的CO差光譜
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 CPR原核表達(dá)載體的酶切驗(yàn)證
        4.3.2 CPR原核表達(dá)蛋白的純化檢測(cè)
        4.3.3 CPR多克隆抗體的特異性檢測(cè)
        4.3.4 CYP4G51-CPR融合蛋白和CPR蛋白供應(yīng)載體的酶切驗(yàn)證
        4.3.5 CYP4G51-CPR融合蛋白的Western檢測(cè)
        4.3.6 CYP4G51-CPR融合蛋白的CO差光譜檢測(cè)
    4.4 討論
第五章 全文總結(jié)
    5.1 結(jié)論
    5.2 創(chuàng)新點(diǎn)
    5.3 研究展望
參考文獻(xiàn)
附錄
縮略詞
致謝
作者簡(jiǎn)介及攻讀學(xué)位期間所取得的學(xué)術(shù)成果


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]保幼激素和蛻皮激素對(duì)德國(guó)小蠊聚集信息素生物合成的影響[J]. 楊惠,張金桐,鄧兵,李宏.  中國(guó)媒介生物學(xué)及控制雜志. 2008(01)
[2]桃蚜不同蚜型DNA多態(tài)性的RAPD研究[J]. 張素方,程家安,楊效文.  昆蟲學(xué)報(bào). 2002(06)



本文編號(hào)：3690316