【目的】長期種植轉(zhuǎn)Bacillus thuringiensis（Bt）基因作物使一些靶標(biāo)害蟲產(chǎn)生了Bt抗性,有研究表明小菜蛾P(guān)lutella xylostella的white基因表達(dá)下調(diào)使其產(chǎn)生了Cry1Ac抗性,由于Pxwhite蛋白與ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白ABCG1同屬于ABCG亞家族,我們推測棉鈴蟲Helicoverpa armigera ABCG1基因（HaABCG1）的表達(dá)下調(diào)可能與棉鈴蟲對Cry1Ac毒素的抗性有關(guān)�！痉椒ā靠寺〔⒎治鯤aABCG1的開放閱讀框（open reading frame,ORF）,通過構(gòu)建HaABCG1基因的表達(dá)載體檢測HaABCG1蛋白在TnH₅細(xì)胞中的亞細(xì)胞定位;通過細(xì)胞毒力實驗驗證HaABCG1蛋白與Cry1Ac毒素的關(guān)系;利用RNAi技術(shù)驗證HaABCG1表達(dá)下調(diào)是否會降低棉鈴蟲對Cry1Ac毒素的敏感性。【結(jié)果】棉鈴蟲ABCG1基因的開放閱讀框長1 896 bp,編碼蛋白含631個氨基酸殘基,分子質(zhì)量估計為69.63 k D。離體昆蟲細(xì)胞表達(dá)的HaABCG1蛋白主要定位在細(xì)胞的核膜和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。通過RNA干擾和生物測定實驗發(fā)現(xiàn)... 

【文章頁數(shù)】：12 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 供試?yán)ハx
    1.2 主要試劑
    1.3 棉鈴蟲ABCG1基因的生物信息學(xué)分析
    1.4 PCR引物和探針的設(shè)計與合成
    1.5 棉鈴蟲總RNA的提取、c DNA第1鏈的合成
    1.6 目的基因的擴(kuò)增及克隆
    1.7 供體質(zhì)粒p EGFP-N1/Ha ABCG1的構(gòu)建
    1.8 昆蟲細(xì)胞的培養(yǎng)以及重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞
    1.9 Ha ABCG1蛋白的亞細(xì)胞定位
    1.1 0 Ha ABCG1介導(dǎo)不同Bt毒素毒力的細(xì)胞功能驗證
    1.1 1 RNAi
    1.1 2 數(shù)據(jù)分析
2 結(jié)果
    2.1 棉鈴蟲Ha ABCG1基因的克隆及蛋白序列分析
    2.2 Ha ABCG1基因的進(jìn)化樹分析
    2.3 Ha ABCG1-GFP融合蛋白的亞細(xì)胞定位以及Ha ABCG1介導(dǎo)Bt毒素穿孔的細(xì)胞毒力功能驗證
    2.4 基于RNAi和生物測定的棉鈴蟲Ha ABCG1基因功能驗證
3 討論與結(jié)論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Cotton bollworm resistance to Bt transgenic cotton: A case analysis[J]. LIU ChenXi, LI YunHe, GAO YuLin, NING ChangMing ＆ WU KongMing State Key Laboratory of Plant Disease and Insect Pests, Institute of Plant Protection, Chinese Academy of Agricultural Science, Beijing 100193, China.  Science China（Life Sciences）. 2010(08)
[2]人工飼養(yǎng)棉鈴蟲技術(shù)的改進(jìn)[J]. 梁革梅,譚維嘉,郭予元.  植物保護(hù). 1999(02)



本文編號：3689109