類甜蛋白（thaumatin-like protein, TLP）是一類具有抗真菌功能的病程相關(guān)蛋白（pathogenesisrelated proteins, PRPs）,在植物病理學研究中受到越來越廣泛的關(guān)注。本研究將前期獲得的小麥（Triticum aestivum） TaTLP1基因定向插入到玉米（Zea mays）泛素（ubiquitin, Ubi）啟動子驅(qū)動的表達載體pLGY-02中,利用農(nóng)桿菌（Agrobacterium）介導的遺傳轉(zhuǎn)化將pLGY-TaTLP1重組體轉(zhuǎn)化至小麥感葉銹病農(nóng)家品種’JW’中,侵染幼胚140個,獲得31個再生株系,再生率為22.1%。對轉(zhuǎn)TaTLP1基因小麥的T₁～T₄代植株進行PCR驗證,初步篩選出了穩(wěn)定遺傳表達的轉(zhuǎn)基因陽性植株;qRT-PCR分析明確了TaTLP1基因在轉(zhuǎn)基因陽性小麥中超量表達;對連續(xù)4代小麥接種葉銹菌（Puccinia triticina）的抗性鑒定則表明,TaTLP1基因的過表達提高了轉(zhuǎn)基因植株對小麥葉銹病的抗性;純合后代生理生化含量的測定進一步證實了轉(zhuǎn)TaTLP1基因小麥中的脯... 

【文章頁數(shù)】：11 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 實驗材料
    1.2 主要試劑
    1.3 實驗方法
        1.3.1 TaTLP1基因植物表達載體的構(gòu)建
        1.3.2 農(nóng)桿菌法轉(zhuǎn)化小麥幼胚愈傷組織及植株再生
        1.3.3 轉(zhuǎn)基因小麥陽性植株的鑒定
        1.3.4 轉(zhuǎn)基因植株的葉銹病抗性鑒定
        1.3.5 RNA的提取和cDNA第1鏈合成
        1.3.6 轉(zhuǎn)基因小麥TaTLP1的表達分析
        1.3.7 轉(zhuǎn)基因小麥的生理指標測定
2 結(jié)果與分析
    2.1 轉(zhuǎn)基因表達載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)基因植株的獲得
    2.2 轉(zhuǎn)TaTLP1基因后代植株的獲得
    2.3 轉(zhuǎn)基因小麥植株的PCR檢測
    2.4 轉(zhuǎn)基因小麥葉銹病抗性鑒定
    2.5 轉(zhuǎn)基因小麥中TaTLP1的表達分析
    2.6 葉銹菌對小麥葉片中脯氨酸含量的影響
    2.7 轉(zhuǎn)基因小麥中β-1,3-葡聚糖酶活性的分析
    2.8 葉銹菌脅迫下轉(zhuǎn)基因小麥葉片H2O2含量的測定
    2.9 葉銹菌對小麥葉片過氧化物酶活性的影響
3 討論
4 結(jié)論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]植物類甜蛋白基因家族研究進展[J]. 劉潮,韓利紅,王海波,高永,唐利洲.  生物技術(shù)通報. 2018(03)
[2]DNS法測定帶有保護劑的β-葡聚糖酶酶活研究[J]. 李皎,楊國武,汪大敏,毛勇,鄧媛.  陜西農(nóng)業(yè)科學. 2014(07)
[3]紫外分光光度技術(shù)測定植物細胞中H2O2的含量[J]. 夏金嬋,苗雨晨,宋純鵬,苗琛.  四川大學學報(自然科學版). 2005(06)

博士論文
[1]鹽脅迫下陸地棉根蛋白差異表達分析及耐鹽相關(guān)基因的功能鑒定[D]. 李武.河南大學 2016

碩士論文
[1]小麥與葉銹菌互作過程中H2O2的分布及其代謝相關(guān)酶基因的表達分析[D]. 王鑫.河北農(nóng)業(yè)大學 2013



本文編號：3680492