自然界中生長(zhǎng)的植物,經(jīng)常會(huì)遭遇干旱、寒冷、鹽堿等非生物脅迫,嚴(yán)重影響植物的生長(zhǎng)、發(fā)育和產(chǎn)量。植物在長(zhǎng)期與環(huán)境相互適應(yīng)的過程中形成了穩(wěn)定的脅迫調(diào)節(jié)系統(tǒng),蛋白磷酸化與去磷酸化便是調(diào)節(jié)生物生命活動(dòng)的重要系統(tǒng)。已有的研究表明,PP2C作為一種重要的蛋白磷酸酶參與植物的脅迫響應(yīng)。本研究基于之前對(duì)擬南芥異源表達(dá)CiPP2C37-like基因和中間錦雞兒葉片瞬時(shí)表達(dá)系統(tǒng)建立的研究基礎(chǔ)上,通過瞬時(shí)表達(dá)系統(tǒng)驗(yàn)證了CiPP2C37-like基因在耐旱和耐鹽方面的功能,并嘗試建立與中間錦雞兒同屬于豆科的模式植物蒺藜苜蓿的穩(wěn)定遺傳轉(zhuǎn)化體系,主要研究結(jié)果如下:1.利用劉坤博士建立的體系,在葉片中瞬時(shí)表達(dá)CiPP2C37-like基因增強(qiáng)了中間錦雞兒幼苗耐旱、耐鹽的能力,表明該基因可作為牧草、作物等抗性育種的候選基因。2.以蒺藜苜蓿生態(tài)型R108葉片為外植體,首先嘗試進(jìn)行了GUS報(bào)告基因的遺傳轉(zhuǎn)化,并通過組織化學(xué)染色證明獲得了表達(dá)GUS報(bào)告基因的蒺藜苜蓿不定芽。3.在進(jìn)行CiPP2C37-like基因轉(zhuǎn)化過程中,進(jìn)一步對(duì)蒺藜苜蓿無菌苗葉片、根段、葉柄為外植體進(jìn)行愈傷誘導(dǎo)、叢芽誘導(dǎo)的比較和篩選,最終確定葉片較根段、... 

【文章頁(yè)數(shù)】：62 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語(yǔ)表
1 引言
    1.1 瞬時(shí)表達(dá)研究進(jìn)展
        1.1.1 穩(wěn)定遺傳轉(zhuǎn)化體系與瞬時(shí)表達(dá)體系
        1.1.2 介導(dǎo)植物瞬時(shí)表達(dá)常用方法
        1.1.3 豆科植物瞬時(shí)表達(dá)研究進(jìn)展
    1.2 蒺藜苜蓿遺傳轉(zhuǎn)化研究進(jìn)展
        1.2.1 轉(zhuǎn)化的理論依據(jù)
        1.2.2 轉(zhuǎn)化方法
            1.2.2.1 根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化
            1.2.2.2 發(fā)根農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化
        1.2.3 影響轉(zhuǎn)化效率的因素
            1.2.3.1 生態(tài)型對(duì)遺傳轉(zhuǎn)化的影響
            1.2.3.2 外植體對(duì)遺傳轉(zhuǎn)化的影響
            1.2.3.3 菌株類型
            1.2.3.4 培養(yǎng)基類型
            1.2.3.5 激素調(diào)控
        1.2.4 褐化預(yù)防
    1.3 PP2C研究現(xiàn)狀
    1.4 研究目的及意義
    1.5 技術(shù)路線
2 材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌株及載體
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
            2.1.3.1 主要試劑以及藥品
            2.1.3.2 試劑配制
            2.1.3.3 培養(yǎng)基配制
        2.1.4 主要儀器設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 基于中間錦雞兒瞬時(shí)表達(dá)體系分析CiPP2C37-like功能
            2.2.1.1 植物的培養(yǎng)
            2.2.1.2 農(nóng)桿菌GV3101感受態(tài)細(xì)胞的制備
            2.2.1.3 電轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞
            2.2.1.4 中間錦雞兒瞬時(shí)表達(dá)農(nóng)桿菌菌懸液的制備
            2.2.1.5 注射法侵染中間錦雞兒葉片
            2.2.1.6 瞬時(shí)表達(dá)CiPP2C37-like中間錦雞兒抗旱性檢測(cè)
            2.2.1.7 瞬時(shí)表達(dá)CiPP2C37-like中間錦雞兒耐鹽性檢測(cè)
        2.2.2 蒺藜苜蓿遺傳轉(zhuǎn)化體系建立
            2.2.2.1 外植體培養(yǎng)方法
            2.2.2.2 電轉(zhuǎn)化EHA105農(nóng)桿菌感受態(tài)細(xì)胞
            2.2.2.3 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的GUS轉(zhuǎn)化流程
            2.2.2.4 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的CiPP2C37-like轉(zhuǎn)化流程
3 結(jié)果與分析
    3.1 葉片瞬時(shí)表達(dá)CiPP2C37-like基因的中間錦雞兒幼苗抗逆性分析
        3.1.1 瞬時(shí)表達(dá)CiPP2C37-like基因的中間錦雞兒幼苗抗旱能力增強(qiáng)
        3.1.2 瞬時(shí)表達(dá)CiPP2C37-like基因的中間錦雞兒幼苗耐鹽能力提高
    3.2 過表達(dá)CiPP2C37-like基因蒺藜苜蓿遺傳轉(zhuǎn)化體系的建立
        3.2.1 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的GUS報(bào)告基因的遺傳轉(zhuǎn)化
            3.2.1.1 外植體材料的選取
            3.2.1.2 愈傷組織的誘導(dǎo)
            3.2.1.3 不定芽的誘導(dǎo)
            3.2.1.4 生根培養(yǎng)
            3.2.1.5 組織化學(xué)染色法檢測(cè)GUS轉(zhuǎn)基因蒺藜苜蓿幼苗
        3.2.2 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的CiPP2C37-like基因轉(zhuǎn)化蒺藜苜蓿
            3.2.2.1 外植體材料的選取
            3.2.2.2 愈傷組織的誘導(dǎo)
            3.2.2.3 不定芽的誘導(dǎo)
            3.2.2.4 生根培養(yǎng)
            3.2.2.5 轉(zhuǎn)CiPP2C37-like基因植株鑒定結(jié)果
4 討論
    4.1 外植體的選取
    4.2 愈傷誘導(dǎo)
    4.3 不定芽分化
    4.4 生根誘導(dǎo)
    4.5 中間錦雞兒葉片瞬時(shí)表達(dá)CiPP2C37-like基因抗逆性分析
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
作者簡(jiǎn)介



本文編號(hào)：3672673