發(fā)布時間：2022-08-08 12:29

　　蘋果（Malus domestica）是薔薇科蘋果屬的多年生木本植物,因其品種多、顏色麗、香氣濃、味酸甜而受到很多人的青睞。近年來,以蘋果為試材的分子生物學研究也越來越廣泛,其中蘋果葉片離體再生和遺傳轉(zhuǎn)化的研究取得了較大進展。MIF2蛋白（mini zinc finger protein）是一種只含有ZF（zinc finger）結(jié)構(gòu)域的小型蛋白質(zhì),前人對其在擬南芥和番茄中進行了研究。本研究首次在‘GL-3’蘋果中克隆MdMIF2基因全長,分別構(gòu)建MdMIF2基因的過表達及沉默載體,并利用農(nóng)桿菌介導法轉(zhuǎn)化蘋果‘GL-3’,分別獲得了MdMIF2基因過表達與沉默轉(zhuǎn)基因植株,通過測定抗性芽再生率、葉片再生率及平均再生芽數(shù),探究MdMIF2基因的功能,為蘋果的高效遺傳轉(zhuǎn)化體系研究提供理論基礎(chǔ)。本試驗主要研究結(jié)果如下:1.從‘GL-3’蘋果中克隆出MdMIF2基因編碼區(qū)序列,全長273bp,編碼90個氨基酸,含有一個ZF結(jié)構(gòu)域。對MdMIF2基因進行了時空表達模式分析與啟動子在線分析,分析了MdMIF2基因的表達特性。2.構(gòu)建了蘋果MdMIF2基因的過表達載體及沉默載體。利用農(nóng)桿菌介導的遺傳轉(zhuǎn)... 

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 C2H2 型鋅指蛋白的概述
        1.1.1 鋅指蛋白的概念及分類
        1.1.2 C2H2 型鋅指蛋白結(jié)構(gòu)與功能
    1.2 MIF2 蛋白的概述
    1.3 果樹離體再生途徑與影響因素
        1.3.1 果樹離體再生的途徑
        1.3.2 影響果樹葉片離體再生的因素
    1.4 果樹遺傳轉(zhuǎn)化概述與影響因素
        1.4.1 果樹遺傳轉(zhuǎn)化的概述
        1.4.2 影響果樹遺傳轉(zhuǎn)化效率的因素
    1.5 本研究的目的與意義
2 材料與方法
    2.1 試驗材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 試驗試劑
        2.1.3 培養(yǎng)基
    2.2 試驗方法
        2.2.1 蘋果核酸的提取與檢測
        2.2.2 Md MIF2 基因的克隆與分析
        2.2.3 蘋果MIF2 蛋白氨基酸序列與MdMIF2 基因表達特性分析
        2.2.4 蘋果MdMIF2 基因過表達載體的構(gòu)建
        2.2.5 蘋果MdMIF2 基因沉默載體的構(gòu)建
        2.2.6 蘋果‘GL-3’的遺傳轉(zhuǎn)化
        2.2.7 蘋果MdMIF2 轉(zhuǎn)基因植株的鑒定
        2.2.8 蘋果MdMIF2 轉(zhuǎn)基因植株的表型調(diào)查
        2.2.9 蘋果MdMIF2 轉(zhuǎn)基因植株的功能驗證
        2.2.10 數(shù)據(jù)調(diào)查和統(tǒng)計分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 蘋果MdMIF2 基因的克隆與分析
        3.1.1 蘋果MdMIF2 基因的克隆
        3.1.2 蘋果MIF2 蛋白的進化樹分析
        3.1.3 蘋果MIF2 蛋白的氨基酸結(jié)構(gòu)域分析
    3.2 蘋果MdMIF2 基因的表達分析
        3.2.1 蘋果MdMIF2 基因的時空表達模式分析
        3.2.2 蘋果MdMIF2 基因啟動子在線分析
    3.3 蘋果MdMIF2 基因轉(zhuǎn)基因植株的獲得與鑒定
        3.3.1 蘋果MdMIF2 基因過表達載體的構(gòu)建及農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化
        3.3.2 蘋果MdMIF2 基因沉默載體構(gòu)建及農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化
        3.3.3 蘋果MdMIF2 轉(zhuǎn)基因植株的獲得與鑒定
    3.4 蘋果MdMIF2 基因的功能分析
        3.4.1 蘋果MdMIF2 轉(zhuǎn)基因植株表型的調(diào)查
        3.4.2 蘋果MdMIF2 基因?qū)z傳轉(zhuǎn)化效率的影響
        3.4.3 蘋果MdMIF2 轉(zhuǎn)基因植株葉片再生速率的變化
        3.4.4 蘋果MdMIF2 轉(zhuǎn)基因植株影響葉片再生能力的比較
4 討論
    4.1 蘋果MdMIF2 基因的克隆與表達特性
    4.2 蘋果MdMIF2 基因與葉片再生能力的關(guān)系
5 結(jié)論
參考文獻
致謝



本文編號：3671512