為了構(gòu)建禽流感病毒H5N1亞型禽流感病毒HA和H9N2亞型禽流感HA融合基因表達(dá)的重組腺病毒。根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查并參考文獻(xiàn)研究結(jié)果,合成了優(yōu)勢(shì)流行H5N1和H9N2的保護(hù)性抗原HA基因的融合基因片段,并將該融合基因片段克隆到在pUC57載體,命名為pUC-57H5H9HA。該融合基因片段經(jīng)特異酶切后與腺病毒穿梭質(zhì)粒pDC315連接,獲得攜帶目的融合基因腺病毒穿梭質(zhì)粒pDC315-H5H9HA;將該重組穿梭質(zhì)粒與AdMax腺病毒包裝系統(tǒng)的骨架質(zhì)粒（pBHGlox（delta）E1,3Cre）經(jīng)Cre/loxP酶切重組,構(gòu)建成重組腺病毒（rAd-H5H9HA）;Ad-H5H9HA感染293細(xì)胞后,擴(kuò)增病毒基因,純化病毒及檢測(cè)病毒滴度。PCR鑒定及基因測(cè)序分析,H5N1HAH9N2HA（H5H9HA）融合基因表達(dá)的重組腺病毒載體構(gòu)建成功;經(jīng)過重組腺病毒r Ad-H5H9HA免疫SPF雞后的抗體檢測(cè),證實(shí)了重組腺病毒r Ad-H5H9HA誘導(dǎo)了H5N1和H9N2的特異抗體,而且抗體水平達(dá)到了國家免疫標(biāo)準(zhǔn)。本研究成功構(gòu)建的重組腺病毒rAd-H5H9HA,可以作為預(yù)防H5N1和H9N2兩個(gè)亞型病毒的... 

【文章頁數(shù)】：4 頁

【文章目錄】：
1 材料
    1.1 細(xì)胞及菌株
    1.2 工具酶及主要試劑
    1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
2 方法
    2.1 H5N1HA和H9N2HA融合基因質(zhì)粒的克隆
    2.2 帶有目的融合基因的腺病毒穿梭質(zhì)粒pDC315-H5H9HA的構(gòu)建
    2.3 重組腺病毒載體的包裝和擴(kuò)繁
    2.4 重組腺病毒Ad-H5H9HA的PCR鑒定及擴(kuò)增純化
    2.5 以編碼H5N1H9N2 HA融合基因的重組腺病毒疫苗免疫動(dòng)物的抗體表達(dá)
3 結(jié)果
    3.1 H5N1HA和H9N2HA融合基因質(zhì)粒pUC57-H5H9HA的鑒定
    3.2 腺病毒穿梭質(zhì)粒pDC315-H5H9HA的構(gòu)建
    3.3 重組腺病毒Ad-H5H9HA的產(chǎn)生和PCR鑒定
    3.4 重組腺病毒疫苗免疫動(dòng)物的抗體表達(dá)
4 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]禽流感疫苗研究進(jìn)展[J]. 申松瑋,彭大新.  動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2019(05)
[2]透過禽流感看我國重大動(dòng)物疫病防控策略[J]. 廖明.  獸醫(yī)導(dǎo)刊. 2017(15)
[3]H9N2亞型禽流感病毒流行病學(xué)及其疫苗的研究進(jìn)展[J]. 叢彥龍,鐘穎,孫藝學(xué),丁壯.  中國獸醫(yī)學(xué)報(bào). 2017(02)
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[6]共表達(dá)甲型流感病毒M1和HA雙基因的重組腺病毒的構(gòu)建及鑒定[J]. 郭建強(qiáng),姚立紅,陳愛珺,徐一,賈潤清,薄洪,董婕,周劍芳,舒躍龍,張智清.  病毒學(xué)報(bào). 2009(02)



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