在復雜的逆境脅迫環(huán)境中,DREB（Dehydration Responsive Element Binding Protein）類轉錄因子發(fā)揮重要作用,目前的研究大多集中在對其功能的分析研究,而對其調(diào)控機制少見報道。DREB結合蛋白中第14位氨基酸（纈氨酸V）和第19位氨基酸（谷氨酸E）對于結合DRE/CRT元件非常關鍵,已有研究表明外源MrDREB1基因可以調(diào)控下游逆境脅迫應答基因MrCAS15A的表達,因此,預測MrDREB1通過與MrCAS15A啟動子區(qū)域的DRE/CRT元件直接結合,調(diào)控其表達。本研究主要取得結果如下:1.提取生長4周的幼苗基因組DNA（Deoxyribonucleic Acid）,通過PCR克隆得到大小為1266 bp的MrCAS15A的DNA序列,再利用擴增得到的基因組序列信息,運用Genome Walking技術擴增獲得1968 bp MrCAS15A啟動子片段。Plant CARE預測分析結果顯示,該啟動子序列中含有多個抗逆相關的功能元件,其中DRE元件（ATGTCGGTA）位于-（1643-1651）bp,該啟動子中還包含與脫落酸、水楊酸等激素響應相關... 

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表Abbreviations
一 引言
    1.1 扁蓿豆簡介
    1.2 植物啟動子概述
        1.2.1 啟動子的結構
        1.2.2 啟動子的類型
        1.2.3 啟動子克隆方法
        1.2.4 啟動子功能研究方法
    1.3 轉錄因子作用機制及研究進展
        1.3.1 轉錄因子與DNA互作的研究進展
        1.3.2 轉錄因子與DNA互作研究方法
        1.3.3 DREB轉錄因子作用機制
        1.3.4 受DREB調(diào)控的下游基因
    1.4 本研究目的與意義
二 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌種與菌株
        2.1.3 常用試劑與試劑盒
        2.1.4 引物序列
    2.2 實驗方法
        2.2.1 MrCAS15A啟動子的克隆
        2.2.2 酵母單雜交實驗
        2.2.3 扁蓿豆MrDREB1 下游抗逆基因的鑒定
三 結果與分析
    3.1 MrCAS15A啟動子的克隆和序列分析
        3.1.1 扁蓿豆基因組DNA的提取
        3.1.2 MrCAS15A DNA序列的內(nèi)含子預測
        3.1.3 PCR克隆MrCAS15A DNA序列
        3.1.4 MrCAS15A DNA序列測序比對結果
        3.1.5 MrCAS15A啟動子克隆
        3.1.6 MrCAS15A的啟動子的生物信息學分析
    3.2 酵母單雜交實驗
        3.2.1 酵母表達載體pAbAi-3×DRE/3×DRE mutant的構建
        3.2.2 pAbAi-3×DRE/3×DRE mutant酵母誘餌菌株的獲得
        3.2.3 假陽性檢測
        3.2.4 酵母表達載體pGADT7 AD-MrDREB1 的構建
        3.2.5 pGADT7-MrDREB1-pAbAi-3×DRE/3×DRE mutant酵母菌株的獲得
        3.2.6 DRE元件與MrDREB1 蛋白互作
    3.3 轉基因扁蓿豆MrDREB1 的功能驗證
        3.3.1 扁蓿豆轉基因根部的熒光檢測
        3.3.2 逆境脅迫下轉基因扁蓿豆的根部表型統(tǒng)計
        3.3.3 扁蓿豆轉基因根部的生理生化指標檢測
        3.3.4 扁蓿豆RNA的提取
        3.3.5 qRT-PCR
四 結論與討論
    4.1 討論
    4.2 結論
參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]啟動子的類型及應用[J]. 賀飛燕,閆建俊,白云鳳,馮瑞云,施俊鳳.  山西農(nóng)業(yè)科學. 2017(01)
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博士論文
[1]扁蓿豆抗寒相關基因的克隆與表達分析[D]. 張宇.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學 2013
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碩士論文
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[2]基于芯片數(shù)據(jù)的水稻非生物逆境相關基因篩選及其啟動子分析[D]. 李嘉平.湖南農(nóng)業(yè)大學 2012
[3]水稻種胚特異基因OsESG1及其啟動子的研究[D]. 房孝良.山東師范大學 2012
[4]枳根特異性contig2基因及啟動子的克隆與分析[D]. 李鳳龍.西南大學 2012
[5]一種啟動子探針載體的構建及低溫誘導啟動子的研究[D]. 沈林麗.南京理工大學 2010



本文編號：3665835