在復(fù)雜的逆境脅迫環(huán)境中,DREB（Dehydration Responsive Element Binding Protein）類轉(zhuǎn)錄因子發(fā)揮重要作用,目前的研究大多集中在對其功能的分析研究,而對其調(diào)控機(jī)制少見報(bào)道。DREB結(jié)合蛋白中第14位氨基酸（纈氨酸V）和第19位氨基酸（谷氨酸E）對于結(jié)合DRE/CRT元件非常關(guān)鍵,已有研究表明外源MrDREB1基因可以調(diào)控下游逆境脅迫應(yīng)答基因MrCAS15A的表達(dá),因此,預(yù)測MrDREB1通過與MrCAS15A啟動(dòng)子區(qū)域的DRE/CRT元件直接結(jié)合,調(diào)控其表達(dá)。本研究主要取得結(jié)果如下:1.提取生長4周的幼苗基因組DNA（Deoxyribonucleic Acid）,通過PCR克隆得到大小為1266 bp的MrCAS15A的DNA序列,再利用擴(kuò)增得到的基因組序列信息,運(yùn)用Genome Walking技術(shù)擴(kuò)增獲得1968 bp MrCAS15A啟動(dòng)子片段。Plant CARE預(yù)測分析結(jié)果顯示,該啟動(dòng)子序列中含有多個(gè)抗逆相關(guān)的功能元件,其中DRE元件（ATGTCGGTA）位于-（1643-1651）bp,該啟動(dòng)子中還包含與脫落酸、水楊酸等激素響應(yīng)相關(guān)... 

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表Abbreviations
一 引言
    1.1 扁蓿豆簡介
    1.2 植物啟動(dòng)子概述
        1.2.1 啟動(dòng)子的結(jié)構(gòu)
        1.2.2 啟動(dòng)子的類型
        1.2.3 啟動(dòng)子克隆方法
        1.2.4 啟動(dòng)子功能研究方法
    1.3 轉(zhuǎn)錄因子作用機(jī)制及研究進(jìn)展
        1.3.1 轉(zhuǎn)錄因子與DNA互作的研究進(jìn)展
        1.3.2 轉(zhuǎn)錄因子與DNA互作研究方法
        1.3.3 DREB轉(zhuǎn)錄因子作用機(jī)制
        1.3.4 受DREB調(diào)控的下游基因
    1.4 本研究目的與意義
二 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌種與菌株
        2.1.3 常用試劑與試劑盒
        2.1.4 引物序列
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 MrCAS15A啟動(dòng)子的克隆
        2.2.2 酵母單雜交實(shí)驗(yàn)
        2.2.3 扁蓿豆MrDREB1 下游抗逆基因的鑒定
三 結(jié)果與分析
    3.1 MrCAS15A啟動(dòng)子的克隆和序列分析
        3.1.1 扁蓿豆基因組DNA的提取
        3.1.2 MrCAS15A DNA序列的內(nèi)含子預(yù)測
        3.1.3 PCR克隆MrCAS15A DNA序列
        3.1.4 MrCAS15A DNA序列測序比對結(jié)果
        3.1.5 MrCAS15A啟動(dòng)子克隆
        3.1.6 MrCAS15A的啟動(dòng)子的生物信息學(xué)分析
    3.2 酵母單雜交實(shí)驗(yàn)
        3.2.1 酵母表達(dá)載體pAbAi-3×DRE/3×DRE mutant的構(gòu)建
        3.2.2 pAbAi-3×DRE/3×DRE mutant酵母誘餌菌株的獲得
        3.2.3 假陽性檢測
        3.2.4 酵母表達(dá)載體pGADT7 AD-MrDREB1 的構(gòu)建
        3.2.5 pGADT7-MrDREB1-pAbAi-3×DRE/3×DRE mutant酵母菌株的獲得
        3.2.6 DRE元件與MrDREB1 蛋白互作
    3.3 轉(zhuǎn)基因扁蓿豆MrDREB1 的功能驗(yàn)證
        3.3.1 扁蓿豆轉(zhuǎn)基因根部的熒光檢測
        3.3.2 逆境脅迫下轉(zhuǎn)基因扁蓿豆的根部表型統(tǒng)計(jì)
        3.3.3 扁蓿豆轉(zhuǎn)基因根部的生理生化指標(biāo)檢測
        3.3.4 扁蓿豆RNA的提取
        3.3.5 qRT-PCR
四 結(jié)論與討論
    4.1 討論
    4.2 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]啟動(dòng)子的類型及應(yīng)用[J]. 賀飛燕,閆建俊,白云鳳,馮瑞云,施俊鳳.  山西農(nóng)業(yè)科學(xué). 2017(01)
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[3]荔枝古樹胚性愈傷組織LcCu/Zn-SOD3基因啟動(dòng)子的克隆及功能驗(yàn)證[J]. 練從龍,盧秉國,賴鐘雄,馮新,林玉玲,陳裕坤,張梓浩.  西北植物學(xué)報(bào). 2015(01)
[4]植物逆境脅迫耐受性啟動(dòng)子的研究進(jìn)展[J]. 張晶紅,那杰.  植物生理學(xué)報(bào). 2014(06)
[5]內(nèi)蒙古扁蓿豆葉片解剖性狀與抗旱性的研究[J]. 李鴻雁,李志勇,師文貴,蔡麗艷,劉磊.  草業(yè)學(xué)報(bào). 2012(03)
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博士論文
[1]扁蓿豆抗寒相關(guān)基因的克隆與表達(dá)分析[D]. 張宇.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[2]大豆、小麥抗逆相關(guān)Gm/TaAREB轉(zhuǎn)錄因子基因、啟動(dòng)子克隆及功能鑒定[D]. 高世慶.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2007

碩士論文
[1]陸地棉GhMBF1c基因及其啟動(dòng)子的克隆與分析[D]. 楊召恩.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2013
[2]基于芯片數(shù)據(jù)的水稻非生物逆境相關(guān)基因篩選及其啟動(dòng)子分析[D]. 李嘉平.湖南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[3]水稻種胚特異基因OsESG1及其啟動(dòng)子的研究[D]. 房孝良.山東師范大學(xué) 2012
[4]枳根特異性contig2基因及啟動(dòng)子的克隆與分析[D]. 李鳳龍.西南大學(xué) 2012
[5]一種啟動(dòng)子探針載體的構(gòu)建及低溫誘導(dǎo)啟動(dòng)子的研究[D]. 沈林麗.南京理工大學(xué) 2010



本文編號：3665835