茶樹(shù)多酚氧化酶（PPO）是一類含銅氧化還原酶,是紅茶加工中品質(zhì)形成的關(guān)鍵酶。本研究克隆了茶樹(shù)PPO基因家族,優(yōu)化了PPO誘導(dǎo)表達(dá)條件,定量分析了茶樹(shù)PPO基因家族在不同品種、不同季節(jié)中的表達(dá),并分析了不同品種茶樹(shù)單核苷酸多態(tài)性。主要研究結(jié)果如下:1、利用生物信息學(xué)方法分析PPO基因的核酸和氨基酸序列,預(yù)測(cè)了編碼蛋白質(zhì)的PPO基因的物理化學(xué)性質(zhì)和結(jié)構(gòu)功能。在PPO基因家族轉(zhuǎn)錄的氨基酸序列中相對(duì)分子量最小的是PPO2,為22.01KD,最大的是PPO1,為65.9KD;PPO1和PPO3編碼蛋白定位于葉綠體中的可能性最大,預(yù)測(cè)這兩個(gè)蛋白含有葉綠體轉(zhuǎn)運(yùn)肽;4個(gè)PPO基因編碼的蛋白不存在信號(hào)肽,均為親水性蛋白,屬于非分泌蛋白,合成后不進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體分泌途徑,直接釋放于細(xì)胞質(zhì)中。PPO2和PPO4編碼的蛋白定位于非葉綠體和非線粒體的其他位置的可能性最大,PPO1和PPO3基因編碼的蛋白可能存在一個(gè)或多個(gè)跨膜螺旋。2、根據(jù)公布的茶樹(shù)基因組,應(yīng)用PCR技術(shù)克隆PPO1和PPO3堿基序列,獲得1800bp左右的特異性條帶,將DH5α感受態(tài)細(xì)胞成功轉(zhuǎn)入PPO重組質(zhì)粒,經(jīng)Bam HI、Not I兩種... 

【文章頁(yè)數(shù)】：72 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1.1 多酚氧化酶的研究進(jìn)展
    1.2 茶樹(shù)多酚氧化酶的研究進(jìn)展
    1.3 多酚氧化酶的酶學(xué)性質(zhì)研究
        1.3.1 溫度對(duì)多酚氧化酶的影響
        1.3.2 pH對(duì)多酚氧化酶的影響
        1.3.3 底物對(duì)多酚氧化酶的影響
        1.3.4 抑制劑對(duì)多酚氧化酶的影響
    1.4 多酚氧化酶的提取方法
        1.4.1 傳統(tǒng)提取法
        1.4.2 新型提取法
    1.5 多酚氧化酶的細(xì)胞定位
    1.6 PPO的抗病性
    1.7 單核苷酸多態(tài)性研究現(xiàn)狀
    1.8 茶樹(shù)單核苷酸多態(tài)性研究現(xiàn)狀
    1.9 研究目的及意義
    1.10 研究?jī)?nèi)容
第二章 茶樹(shù)PPO基因的生物信息學(xué)分析
    2.1 茶樹(shù)PPO基因家族的核酸序列的基本分析
    2.2 茶樹(shù)PPO家族基因編碼蛋白的理化性質(zhì)分析
    2.3 茶樹(shù)PPO基因編碼蛋白的信號(hào)肽與細(xì)胞定位分析
    2.4 茶樹(shù)PPO基因編碼蛋白跨膜結(jié)構(gòu)域的預(yù)測(cè)與分析
    2.5 小結(jié)與討論
第三章 茶樹(shù)PPO基因的克隆及原核表達(dá)
    3.1 材料與方法
        3.1.1 材料
        3.1.2 方法
    3.2 結(jié)果與分析
        3.2.1 茶樹(shù)鮮葉RNA提取
        3.2.2 PPO基因PCR克隆
        3.2.3 PPO基因原核表達(dá)
    3.3 小結(jié)與討論
第四章 不同茶樹(shù)品種的PPO比較分析
    4.1 材料與方法
        4.1.1 材料
        4.1.2 方法
    4.2 結(jié)果與分析
        4.2.1 多酚氧化酶在不同品種中變化規(guī)律
        4.2.2 不同茶樹(shù)品種real-time PCR分析
        4.2.3 酶活性與熒光定量的關(guān)聯(lián)分析
    4.3 小結(jié)與討論
第五章 茶樹(shù)PPO基因的SNP分析
    5.1 材料和方法
        5.1.1 材料
        5.1.2 方法
    5.2 結(jié)果與分析
        5.2.1 PPO基因外顯子的SNPs分析
        5.2.2 SNP與茶樹(shù)品種鑒定
        5.2.3 導(dǎo)致氨基酸變異的SNP
        5.2.4 PPO的酶活性與SNP位點(diǎn)關(guān)聯(lián)分析
        5.2.5 SNPs與茶樹(shù)品種基因型的關(guān)聯(lián)分析
    5.3 小結(jié)與討論
第六章 總結(jié)與展望
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]microRNA-146a單核苷酸多態(tài)性與大腸癌遺傳易感性的關(guān)聯(lián)研究[J]. 朱文勁,徐飛鵬,許慶文,魯玨,林琳,黃哲,王瑋尉,黃先進(jìn).  現(xiàn)代醫(yī)院. 2019(03)
[2]SUMO化和磷酸化的相互作用與共同修飾[J]. 吳樹(shù)強(qiáng),朱水山.  中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào). 2019(02)
[3]金銀花多酚氧化酶抑制劑的篩選[J]. 李菁,馬東來(lái),劉宏偉,馮建明,李靜娟,鄭玉光.  中成藥. 2019(02)
[4]廣東客家茶樹(shù)種質(zhì)資源兒茶素特性分析[J]. 喬小燕,黃華林,李波,姜曉輝,陳棟.  江西農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2019(01)
[5]利用CRISPR/Cas9敲除葡萄VviPDS1基因的研究[J]. 郭曄,萬(wàn)東艷,柴壯壯,王躍進(jìn),文穎強(qiáng).  園藝學(xué)報(bào). 2019(04)
[6]抑制山藥中多酚氧化酶活性的研究[J]. 段勇.  食品工程. 2018(04)
[7]橄欖多酚氧化酶和過(guò)氧化物酶的抑制劑篩選及其熱失活動(dòng)力學(xué)[J]. 吳倩,余元善,劉淑媚,肖更生,徐玉娟.  現(xiàn)代食品科技. 2019(02)
[8]RBM20基因新發(fā)錯(cuò)義突變致家族性兒童擴(kuò)張性心肌病1例報(bào)告[J]. 彭昌,徐合平,王世遠(yuǎn).  臨床兒科雜志. 2018(12)
[9]兒茶素對(duì)軟脂酸導(dǎo)致的大鼠原代肝細(xì)胞損傷的保護(hù)作用[J]. 苗良生,王曉娟,關(guān)新江,李萬(wàn)鵬,董小章,倪秀梅,李雪,張勇.  延安大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)科學(xué)版). 2018(04)
[10]利用CRISPR/Cas9技術(shù)定點(diǎn)敲除煙草多酚氧化酶基因NtPPO1[J]. 姚恒,楊大海,白戈,謝賀.  生物技術(shù)通報(bào). 2018(11)

博士論文
[1]擬南芥抗逆相關(guān)泛素連接酶SINA2的調(diào)控分析及小麥SINA同源基因的克隆[D]. 陳陽(yáng).西北農(nóng)林科技大學(xué) 2018
[2]茶多酚氧化酶基因的克隆及其工程菌的構(gòu)建[D]. 王乃棟.山東農(nóng)業(yè)大學(xué) 2012
[3]機(jī)械傷害誘導(dǎo)豌豆幼苗防御性反應(yīng)及其調(diào)控機(jī)制[D]. 劉艷.中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005

碩士論文
[1]黃顙魚(yú)生長(zhǎng)激素基因多態(tài)性與生長(zhǎng)性狀的關(guān)聯(lián)性研究[D]. 李美娟.華南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[2]茶樹(shù)AMP脫氨酶基因的克隆及咖啡堿合成酶基因（TCS1）的cSNP分析[D]. 魏艷麗.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[3]茶樹(shù)咖啡堿與可可堿含量、關(guān)鍵酶基因表達(dá)量及cSNP相關(guān)性分析[D]. 李金.安徽農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013
[4]黃牛KLF7、KLF11和KLF15基因的單核苷酸多態(tài)性及其與生長(zhǎng)性狀的關(guān)聯(lián)研究[D]. 馬亮.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2010
[5]茶樹(shù)多酚氧化酶的基因克隆與原核表達(dá)[D]. 劉敬衛(wèi).華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2009
[6]亞洲玉米螟幼蟲(chóng)酚氧化酶原純化及其組織定位研究[D]. 呂文靜.揚(yáng)州大學(xué) 2009
[7]膜蛋白跨膜螺旋預(yù)測(cè)的研究[D]. 李吉.上海交通大學(xué) 2010
[8]姜黃素、槲皮素等八種效應(yīng)物對(duì)光肩星天牛幼蟲(chóng)PPO影響的試驗(yàn)研究[D]. 葉雅杰.東北師范大學(xué) 2006



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