發(fā)布時(shí)間：2017-05-14 18:18

  本文關(guān)鍵詞：小麥磷脂酶Dδ基因的克隆與功能鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：小麥(Triticum aestivum L.)是我國(guó)的第三大糧食作物,與國(guó)家的糧食安全密切相關(guān)。我國(guó)有9913萬(wàn)公頃的鹽堿土地,鹽堿脅迫抑制小麥的生長(zhǎng)發(fā)育,導(dǎo)致產(chǎn)量降低。因而,研究小麥的抗鹽機(jī)制,進(jìn)行小麥的抗性遺傳改良意義重大。本研究從普通小麥揚(yáng)麥158中克隆到TaPLDδ基因,利用遺傳學(xué)、生理學(xué)和分子生物學(xué)的方法對(duì)其進(jìn)行了功能鑒定,證明其參與植物的鹽脅迫應(yīng)答及花發(fā)育,主要的研究結(jié)果如下:(1)小麥TaPLDδ基因cDNA的全長(zhǎng)為2749bp,包含一個(gè)2589bp的完整開(kāi)放閱讀框,共編碼862個(gè)氨基酸,它的氨基酸序列包含2個(gè)HKD基序,具有磷脂酶D的保守結(jié)構(gòu)域。(2)表達(dá)分析結(jié)果表明,TaPLDδ基因在小麥幼葉和幼根中TaPLDδ基因的表達(dá)量較高。滲透脅迫、脫落酸(abscisic acid,ABA)、赤霉素(gibberellins,GA)、茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)和水楊酸(salicylic acid,SA)能夠誘導(dǎo)TaPLDδ上調(diào)表達(dá)。(3)構(gòu)建了地塞米松(dexamethasone,DEX)可誘導(dǎo)的TaPLDδ過(guò)表達(dá)轉(zhuǎn)基因擬南芥。鹽脅迫處理后,轉(zhuǎn)基因擬南芥植株的主根較長(zhǎng),且比野生型的側(cè)根早1-2天生長(zhǎng)出來(lái)。生理分析結(jié)果表明,鹽堿脅迫下,過(guò)氧化物酶(guaiacol perxidase,POD)、過(guò)氧化氫酶(catalase,CAT)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性更高,丙二醛(malomdiadehyde,MDA)含量更低,與DAB(3,3'-diaminobenzidine)染色的結(jié)果相一致。(4)過(guò)表達(dá)轉(zhuǎn)基因植株的開(kāi)花時(shí)間提前。定量PCR的結(jié)果表明,過(guò)表達(dá)植株的AP1(APETALA 1)、AP3(APETALA 3)和VRN1(VERNALIZATION 1)等基因的表達(dá)量明顯提高,促進(jìn)了花期轉(zhuǎn)化和花器官建成。
【關(guān)鍵詞】：小麥 磷脂酶D 鹽脅迫 開(kāi)花 定量PCR 抗氧化酶類
【學(xué)位授予單位】：天津農(nóng)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S512.1
【目錄】：

• 中文摘要9-10
• 英文摘要10-11
• 第一章 引言11-21
• 1 文獻(xiàn)綜述11-19
• 1.1 鹽脅迫對(duì)植物的影響11-12
• 1.2 植物抗鹽的調(diào)節(jié)機(jī)制12-15
• 1.3 花期調(diào)節(jié)途徑15-17
• 1.4 磷脂酶D的概述17-19
• 2 本文研究的主要內(nèi)容19-20
• 3 本試驗(yàn)的研究目的與意義20-21
• 第二章 小麥磷脂酶Dδ基因的克隆及其表達(dá)分析21-40
• 1 材料21-24
• 1.1 試驗(yàn)材料21
• 1.2 主要藥品與試劑的配制21-24
• 1.3 主要儀器和設(shè)備24
• 2 試驗(yàn)方法24-30
• 2.1 小麥葉片總RNA的提取及cDNA的制備24-26
• 2.2 TaPLDδ基因的克隆26-28
• 2.3 陽(yáng)性克隆菌株的保存及其質(zhì)粒的提取28-29
• 2.4 Ta PLDδ基因的生物信息學(xué)分析29
• 2.5 Ta PLDδ基因在小麥各組織、滲透處理和激素處理中的表達(dá)分析29-30
• 3 結(jié)果與分析30-39
• 3.1 TaPLDδ基因的克隆30-31
• 3.2 TaPLDδ基因的生物信息學(xué)分析31-36
• 3.3 TaPLDδ基因在小麥各組織、滲透處理和激素處理中的表達(dá)分析36-39
• 4 討論39-40
• 第三章 小麥磷脂酶Dδ基因表達(dá)載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)化40-49
• 1 材料40-42
• 1.1 試驗(yàn)材料40
• 1.2 主要藥品與試劑的配制40-41
• 1.3 主要儀器和設(shè)備41-42
• 2 試驗(yàn)方法42-45
• 2.1 TaPLDδ基因入門(mén)載體的構(gòu)建42
• 2.2 TaPLDδ基因表達(dá)載體的構(gòu)建42
• 2.3 TaPLDδ基因的轉(zhuǎn)化42-45
• 3 結(jié)果與分析45-48
• 3.1 TaPLDδ基因表達(dá)載體的構(gòu)建45-47
• 3.2 TaPLDδ基因轉(zhuǎn)化擬南芥47
• 3.3 轉(zhuǎn)基因擬南芥的GUS染色47-48
• 4 討論48-49
• 第四章 小麥磷脂酶Dδ基因的表型鑒定與功能分析49-64
• 1 材料49-50
• 1.1 試驗(yàn)材料49
• 1.2 主要藥品及試劑的配制49-50
• 1.3 主要的試驗(yàn)儀器50
• 2 試驗(yàn)方法50-55
• 2.1 轉(zhuǎn)基因擬南芥在鹽脅迫下的表型觀察50
• 2.2 DAB染色50-51
• 2.3 轉(zhuǎn)基因擬南芥的抗氧化性測(cè)定51-55
• 2.4 轉(zhuǎn)基因擬南芥的花期觀察及鑒定55
• 3 結(jié)果與分析55-62
• 3.1 轉(zhuǎn)基因擬南芥鹽脅迫處理的表型觀察55-56
• 3.2 DAB染色56-57
• 3.3 抗氧化酶類活性的測(cè)定及其分析57-60
• 3.4 轉(zhuǎn)基因擬南芥的花期觀察及其定量分析60-62
• 4 討論62-64
• 第五章 結(jié)論64-65
• 參考 文獻(xiàn)65-70
• 致謝70-71
• 攻讀碩士學(xué)位論文期間發(fā)表的論文71

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