達(dá)氏鱘（Acipenser dabryanus）是我國特有的一種淡水定居性珍稀魚類。早期達(dá)氏鱘曾是長(zhǎng)江上游重要的經(jīng)濟(jì)魚類之一,20世紀(jì)后期由于過度捕撈、水利工程興建、航道整治、挖沙活動(dòng)等原因,達(dá)氏鱘生存環(huán)境遭到嚴(yán)重破壞,物種處于極度瀕危狀況,已于1988年被列為國家一級(jí)保護(hù)動(dòng)物。因此,其物種保護(hù)、資源增殖的研究亟待加強(qiáng),尤其在繁殖生物學(xué)方面的研究更是亟需關(guān)注。經(jīng)過十多年的發(fā)展,魚類生殖細(xì)胞移植技術(shù)已成功應(yīng)用到多種魚類,在種質(zhì)資源保存、增殖放流和物種恢復(fù)方面具有重大的應(yīng)用潛力。近年來有關(guān)達(dá)氏鱘精原細(xì)胞移植的研究已取得階段性成果,但高效的移植依賴于精原干細(xì)胞的體外增殖培養(yǎng)。前期我們已開展了達(dá)氏鱘精原細(xì)胞培養(yǎng)方面的工作,但對(duì)培養(yǎng)的達(dá)氏鱘精原干細(xì)胞鑒定還有所欠缺。目前,已鑒定的達(dá)氏鱘生殖細(xì)胞標(biāo)記基因有dnd和vasa,但是它們除了在精原細(xì)胞表達(dá)外,在精母細(xì)胞中也有表達(dá),因此,有必要鑒定在特異類型生殖細(xì)胞表達(dá)的基因,進(jìn)而為體外培養(yǎng)精原干細(xì)胞的鑒定奠定基礎(chǔ)。本研究鑒定了兩個(gè)生殖細(xì)胞特異表達(dá)的基因:dmc1和ly75,通過RT-PCR技術(shù)分別克隆得到達(dá)氏鱘dmc1和ly75基因的編碼區(qū)序列,運(yùn)用生物... 

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 達(dá)氏鱘研究進(jìn)展
        1.1.1 生物學(xué)特征及生活習(xí)性
        1.1.2 地理分布和資源現(xiàn)狀
        1.1.3 研究現(xiàn)狀
    1.2 達(dá)氏鱘性腺的發(fā)育及繁殖生物學(xué)
    1.3 生殖細(xì)胞
        1.3.1 魚類生殖細(xì)胞的基本特征
        1.3.2 生殖細(xì)胞的鑒定
        1.3.3 魚類生殖細(xì)胞的標(biāo)記基因
    1.4 dmc1基因研究進(jìn)展
        1.4.1 Dmc1結(jié)構(gòu)特征
        1.4.2 dmc1基因的表達(dá)和功能
    1.5 ly75基因研究進(jìn)展
        1.5.1 Ly75結(jié)構(gòu)和序列特征
        1.5.2 ly75基因的表達(dá)特征研究
        1.5.3 Ly75的功能研究
    1.6 本研究的目的及意義
第2章 達(dá)氏鱘dmc1基因的cDNA克隆及在精子生成中的表達(dá)分析
    前言
    2.1 材料和方法
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 主要儀器
        2.1.3 試劑盒與主要試劑
        2.1.4 總RNA提取步驟
        2.1.5 cDNA模板制備
        2.1.6 達(dá)氏鱘dmc1基因編碼區(qū)克隆
        2.1.7 PCR產(chǎn)物電泳檢測(cè)、回收及純化
        2.1.8 連接和轉(zhuǎn)化
        2.1.9 菌落PCR及測(cè)序
        2.1.10 達(dá)氏鱘dmc1基因序列特征分析和系統(tǒng)進(jìn)化樹構(gòu)建
        2.1.11 達(dá)氏鱘dmc1基因的組織表達(dá)特性分析
        2.1.12 石蠟切片和HE染色
        2.1.13 達(dá)氏鱘dmc1基因在不同發(fā)育時(shí)期精巢中的表達(dá)分析
        2.1.14 原位雜交
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 達(dá)氏鱘dmc1基因編碼區(qū)全長(zhǎng)克隆
        2.2.2 達(dá)氏鱘dmc1基因的生物信息學(xué)分析
        2.2.3 達(dá)氏鱘dmc1基因的組織表達(dá)特征
        2.2.4 達(dá)氏鱘精巢組織的發(fā)育
        2.2.5 達(dá)氏鱘dmc1基因real-timePCR標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
        2.2.6 達(dá)氏鱘dmc1mRNA在不同發(fā)育時(shí)期精巢中的表達(dá)水平
        2.2.7 達(dá)氏鱘dmc1mRNA在精巢中的定位
    2.3 討論
第3章 達(dá)氏鱘ly75基因cDNA克隆與組織表達(dá)特性研究
    前言
    3.1 材料和方法
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 主要儀器
        3.1.3 主要試劑
        3.1.4 總RNA的提取步驟
        3.1.5 cDNA模板制備
        3.1.6 達(dá)氏鱘ly75基因部分cDNA序列獲得
        3.1.7 PCR產(chǎn)物電泳檢測(cè)及純化
        3.1.8 連接和轉(zhuǎn)化
        3.1.9 菌落PCR及測(cè)序
        3.1.10 達(dá)氏鱘ly75基因序列特征分析和系統(tǒng)進(jìn)化樹構(gòu)建
        3.1.11 qRT-PCR分析
        3.1.12 石蠟切片原位雜交
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 達(dá)氏鱘ly75基因cDNA序列特征分析
        3.2.2 達(dá)氏鱘ly75基因同源性分析
        3.2.3 達(dá)氏鱘ly75基因組織表達(dá)分析
        3.2.4 達(dá)氏鱘ly75基因real-timePCR標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
        3.2.5 達(dá)氏鱘ly75基因在不同發(fā)育時(shí)期精巢的表達(dá)分析
        3.2.6 達(dá)氏鱘ly75基因mRNA在精巢中的定位
    3.3 討論
第4章 總結(jié)
參考文獻(xiàn)
附錄Ⅰ 發(fā)表的論文
附錄Ⅱ 參加的課題
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[10]牦牛和犏牛Dmc1基因序列分析及睪丸組織轉(zhuǎn)錄水平研究[J]. 李賢,李齊發(fā),趙興波,徐洪濤,顧垚,朱翔,謝莊,劉紅林.  中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2010(15)

碩士論文
[1]達(dá)氏鱘微衛(wèi)星分離及其親子鑒定研究[D]. 駱慧.華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2013



本文編號(hào)：3656302