發(fā)布時間：2022-07-04 21:24

　　【目的】實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR,qRT-PCR）以高靈敏度和特異性等優(yōu)點,成為基因表達(dá)分析的主要工具,而選擇適合不同條件下工作的內(nèi)參是qRT-PCR分析的前提。篩選得到適用于杜鵑紅山茶不同器官、不同時期花瓣的qRT-PCR分析的內(nèi)參基因,為后續(xù)相關(guān)基因功能研究提供可用的內(nèi)參基因。【方法】選擇轉(zhuǎn)錄延伸因子編碼基因（EF1α）、α-tubulin（TUA）、β-tubulin（TUB）、Ubiquitin（UBQ）、肌動蛋白（Actin）和甘油醛-3-磷酸脫氫酶（Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH）6個看家基因,使用2種不同的計算程序GeNorm和NormFinder評估了6個基因表達(dá)的穩(wěn)定性。進(jìn)一步通過CaGASA3基因的表達(dá)模式驗證了所選內(nèi)參基因的適用性�！窘Y(jié)果】在不同器官中通過GeNorm和NormFinder篩選出穩(wěn)定性最好的基因,排名前2位的均為TUA和GAPDH,GAPDH基因在兩種計算程序評估中穩(wěn)定性均最佳。而在不同時期花瓣中,通過2種程序得出排名前2位的內(nèi)參基因均為T... 

【文章頁數(shù)】：9 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 試驗材料
    1.2 試驗方法
        1.2.1 總RNA提取和cDNA合成
        1.2.2 內(nèi)參基因的選擇和引物設(shè)計
        1.2.3 qRT-PCR反應(yīng)條件
        1.2.4 引物特異性鑒定及擴(kuò)增效率計算
        1.2.5 內(nèi)參基因穩(wěn)定性驗證及CaGASA3基因表達(dá)模式分析
        1.2.6 數(shù)據(jù)分析與內(nèi)參基因的確認(rèn)
2 結(jié)果與分析
    2.1 總RNA質(zhì)量及引物特異性
    2.2 引物擴(kuò)增特異性分析和擴(kuò)增效率
    2.3 候選內(nèi)參基因表達(dá)豐度分析
    2.4 候選內(nèi)參基因表達(dá)穩(wěn)定性分析
        2.4.1 GeNorm分析
        2.4.2 NormFinder分析
    2.5 內(nèi)參基因穩(wěn)定性的驗證
3 討論
4 結(jié)論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]萱草不同器官實時熒光定量PCR內(nèi)參基因的篩選[J]. 梁錦,劉海婷,鐘榮,李昊,尹冬梅,劉翔,秦巧平,張志國,段可,倪迪安.  植物生理學(xué)報. 2020(09)
[2]大別山黃杜鵑根莖葉花內(nèi)參基因的表達(dá)穩(wěn)定性評價[J]. 張羽佳,舒讀,董雪,杜睿琛,李志良,王書珍.  分子植物育種. 2020(21)
[3]彩色馬蹄蓮不同品種和組織qRT-PCR內(nèi)參基因篩選[J]. 周琳,張永春,蔡友銘,趙冰雪,付椿淇,楊柳燕.  分子植物育種. 2020(12)
[4]連翹花器官生長階段內(nèi)參基因篩選與評估[J]. 曹亞萍,王勇飛,賈孟君,賀嘉欣,張鑫瑞,李政,喬永剛,宋蕓.  山西農(nóng)業(yè)科學(xué). 2020(03)
[5]甜櫻桃花芽不同發(fā)育時期內(nèi)參基因的篩選與驗證[J]. 仇志浪,何美乾,文壯,楊鵾,洪怡,文曉鵬.  種子. 2020(02)
[6]小蒼蘭實時熒光定量PCR中的內(nèi)參基因篩選[J]. 丁蘇芹,李璽,唐東芹.  南京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2020(03)
[7]不同光質(zhì)條件下刺葡萄紅色愈傷組織的RT-qPCR內(nèi)參基因篩選[J]. 潘紅,賴呈純,張靜,黃賢貴,林玉玲,賴鐘雄.  應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報. 2019(06)
[8]不同光照條件下杜鵑紅山茶幼苗的生長效應(yīng)及抗氧化生理響應(yīng)[J]. 李先民,劉新亮,李春牛,盧家仕,周錦業(yè),黃昌艷,卜朝陽.  熱帶作物學(xué)報. 2019(04)
[9]板栗實時定量PCR內(nèi)參基因的篩選與驗證[J]. 陳國松,李靖同,劉陽,曹慶芹,張卿,秦嶺,邢宇.  植物生理學(xué)報. 2019(03)
[10]授粉后紅球姜雌性生殖器官qRT-PCR的內(nèi)參基因篩選[J]. 林浩川,鐘春梅,孫姝蘭.  華南師范大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 2017(01)



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