目的:研究沉默中期因子（midkine,MK）基因表達后人肝癌氟尿嘧啶（uorouracil,Fu）耐藥細胞株Bel/Fu對5-Fu敏感性的變化,并初步探討可能的作用機制。方法:采用脂質(zhì)體瞬時轉(zhuǎn)染法將MK-siRNA轉(zhuǎn)入Bel/Fu細胞,分別應用實時熒光定量PCR及蛋白質(zhì)印跡法檢測MK mRNA及蛋白的表達水平。MKsiRNA聯(lián)合5-Fu處理后,分別采用MTT及FCM法檢測肝癌Bel/Fu細胞的增殖抑制率及凋亡情況,采用蛋白質(zhì)印跡法檢測磷脂酰肌醇3-激酶（phosphoinositide 3-kinase,PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B,PKB,Akt）信號通路中相關蛋白磷酸化PI3K、磷酸化Akt和核因子-κB（nuclear factorkappa B,NF-κB）及凋亡相關蛋白Bcl-2、survivin和caspase-3的表達水平。結(jié)果:MK-siRNA轉(zhuǎn)入Bel/Fu細胞后,MK mRNA和蛋白的表達水平均明顯下調(diào)（P值均<0.05）。MK-siRNA轉(zhuǎn)染組5-Fu對Bel/Fu細胞的半數(shù)抑制濃度（half inhibitory concen... 

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 細胞、試劑及儀器
    1.2 方法
        1.2.1 細胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染
        1.2.2 MTT法檢測細胞的增殖抑制率
        1.2.3 FCM法檢測細胞凋亡率
        1.2.4 實時熒光定量PCR檢測MK m RNA的表達水平
        1.2.5 蛋白質(zhì)印跡法檢測MK蛋白、PI3K/Akt信號通路中相關蛋白p-PI3K、p-Akt和NF-κB以及凋亡相關蛋白Bcl-2、survivin和caspase-3的表達
    1.3 統(tǒng)計學方法
2 結(jié)果
    2.1 M K-s i RNA對肝癌B e l/Fu細胞中M K m RNA和蛋白表達的影響
    2.2 沉默MK基因表達增強肝癌Bel/Fu細胞對5-Fu的敏感性
    2.3 沉默MK基因表達后5-Fu對Bel/Fu細胞凋亡的影響
    2.4 沉默MK基因表達后5-Fu對PI3K/Akt信號通路中相關蛋白表達的影響
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]In vitro and in vivo suppression of hepatocellular carcinoma growth by midkine-antisense oligonucleotide-loaded nanoparticles[J]. Li-Cheng Dai, Xiang Wang, Shu-Qiong Niu, Shui-Xin Yang, Huzhou Key Laboratory of Molecular Medicine, Huzhou Central Hospital, Huzhou 313000, Zhejiang Province, China Xing Yao, Department of General Surgery, Huzhou Central Hospital, Huzhou 313000, Zhejiang Province, China Lin-Fu Zhou, Fang-Fang Fu, Zhejiang University School of Medicine, Hangzhou 310016, Zhejiang Province, China Jin-Liang Ping, Department of Pathology, Huzhou Central Hospital, Huzhou 313000, Zhejiang Province, China.  World Journal of Gastroenterology. 2009(16)



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