隨著臨床與緊急事故中快速止血需求的不斷增加,新型止血敷料設計與開發(fā)已成為當前的研究熱點。人發(fā)角蛋白作為一種天然的生物材料,具有優(yōu)異的止血、創(chuàng)傷修復、生物相容性和降解性,被廣泛的應用于生物醫(yī)學領域。針對人發(fā)角蛋白提取物成分復雜、質(zhì)量及氨基酸組成難以控制等局限性,本課題組對Ι型人發(fā)角蛋白K37進行了重組表達與純化,并首次證明了K37重組蛋白同樣具備良好的止血性能。然而,人發(fā)角蛋白K37序列中有效的止血功能區(qū)域并不明確,并且由于角蛋白天然不可溶,重組角蛋白也為不溶性的包涵體。因此,研究人發(fā)角蛋白的止血功能區(qū)域以及通過基因改造提高重組角蛋白的溶解性對于新型止血蛋白材料的開發(fā)與設計具有重要意義。本課題通過截取重組角蛋白K37中序列最長、包含氨基酸信息最全面的第三個α-螺旋結(jié)構(gòu)即K37-3α序列作為研究模型,并通過基因改造得到了CMK37-3α序列以增加重組角蛋白的可溶性,并利用重組蛋白異源表達技術對K37-3α及CMK37-3α兩種重組蛋白進行了表達、純化與理化表征。再采用靜電紡絲技術與涂層法制備了一種新型的止血敷料—重組角蛋白/聚己內(nèi)酯纖維復合膜,進而來考查K37-3α及CMK37-3α重組角... 

【文章頁數(shù)】：86 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
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英文摘要
英漢縮略名詞對照表
1 緒論
    1.1 止血材料的概述
    1.2 人發(fā)角蛋白的止血應用
    1.3 人發(fā)重組角蛋白的概述
    1.4 重組角蛋白K37 的概述
    1.5 科學問題的提出及研究意義
    1.6 課題主要內(nèi)容及技術路線
2 功能區(qū)域的截取、表達純化及表征
    2.1 引言
    2.2 材料與儀器
        2.2.1 實驗材料
        2.2.2 實驗儀器
    2.3 實驗方法
        2.3.1 主要試劑的配制
        2.3.2 K37 角蛋白功能區(qū)域的選取
        2.3.3 K37-3α重組角蛋白的表達與純化
        2.3.4 基因測序鑒定
        2.3.5 生物信息學分析預測
        2.3.6 蛋白標準曲線的繪制
        2.3.7 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳
        2.3.8 基質(zhì)輔助激光解析串聯(lián)飛行時間質(zhì)譜
        2.3.9 紫外全波長掃描光譜檢測
        2.3.10 傅里葉變換紅外光譜檢測
        2.3.11 圓二色光譜檢測
        2.3.12 X-射線衍射檢測
        2.3.13 統(tǒng)計分析
    2.4 結(jié)果與討論
        2.4.1 基因測序驗證分析
        2.4.2 生物信息學分析
        2.4.3 K37-3α重組角蛋白產(chǎn)量分析
        2.4.4 K37-3α重組角蛋白的理化性質(zhì)分析
    2.5 小結(jié)
3 功能區(qū)域的改造、表達純化及表征
    3.1 引言
    3.2 材料與儀器
        3.2.1 實驗材料
        3.2.2 實驗儀器
    3.3 實驗方法
        3.3.1 主要試劑的配制
        3.3.2 功能區(qū)域改造
        3.3.3 CMK37-3α重組蛋白的表達與純化
        3.3.4 基因測序鑒定
        3.3.5 生物信息學分析預測
        3.3.6 蛋白標準曲線的繪制
        3.3.7 CMK37-3α重組蛋白的理化性質(zhì)檢測
        3.3.8 統(tǒng)計分析
    3.4 結(jié)果與討論
        3.4.1 基因測序驗證分析
        3.4.2 生物信息學分析
        3.4.3 CMK37-3α重組角蛋白的產(chǎn)量分析
        3.4.4 CMK37-3α重組角蛋白的理化性質(zhì)分析
    3.5 小結(jié)
4 重組角蛋白/聚己內(nèi)酯纖維復合膜的制備及性能研究
    4.1 引言
    4.2 實驗材料與儀器
        4.2.1 實驗材料
        4.2.2 實驗儀器
    4.3 實驗方法
        4.3.1 重組角蛋白/聚己內(nèi)酯紡絲復合膜的制備
        4.3.2 掃描電鏡(SEM)檢測
        4.3.3 傅里葉變換紅外光譜檢測
        4.3.4 X-射線衍射檢測
        4.3.5 力學性能檢測
        4.3.6 親水性能檢測
        4.3.7 體外促凝血實驗
        4.3.8 體內(nèi)止血實驗
        4.3.9 統(tǒng)計分析
    4.4 結(jié)果與討論
        4.4.1 SEM分析
        4.4.2 FTIR-ATR分析
        4.4.3 晶型結(jié)構(gòu)分析
        4.4.4 力學性能分析
        4.4.5 潤濕性能分析
        4.4.6 體外促凝血實驗分析
        4.4.7 體內(nèi)止血實驗分析
    4.5 小結(jié)
5 重組角蛋白/聚己內(nèi)酯纖維復合膜的細胞相容性
    5.1 引言
    5.2 實驗材料與儀器
        5.2.1 實驗材料
        5.2.2 實驗儀器
    5.3 實驗方法
        5.3.1 細胞培養(yǎng)
        5.3.2 細胞的接種
        5.3.3細胞的毒性實驗
        5.3.4 細胞的死活鑒定
        5.3.5 細胞的增殖檢測
        5.3.6 細胞的形態(tài)觀察
        5.3.7 統(tǒng)計學分析
    5.4 結(jié)果與討論
        5.4.1 細胞培養(yǎng)狀態(tài)
        5.4.2 細胞毒性分析
        5.4.3 細胞死活染色分析
        5.4.4 細胞的增殖分析
        5.4.5 細胞形態(tài)分析
    5.5 小結(jié)
6 全文總結(jié)與后續(xù)工作建議
    6.1 全文主要結(jié)論
    6.2 后續(xù)工作建議
參考文獻
附錄
    A.作者在攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文
    B.作者在攻讀碩士學位期間參與的科研項目
    C.學位論文數(shù)據(jù)集:
致謝



本文編號：3654577