隨著臨床與緊急事故中快速止血需求的不斷增加,新型止血敷料設(shè)計(jì)與開發(fā)已成為當(dāng)前的研究熱點(diǎn)。人發(fā)角蛋白作為一種天然的生物材料,具有優(yōu)異的止血、創(chuàng)傷修復(fù)、生物相容性和降解性,被廣泛的應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。針對(duì)人發(fā)角蛋白提取物成分復(fù)雜、質(zhì)量及氨基酸組成難以控制等局限性,本課題組對(duì)Ι型人發(fā)角蛋白K37進(jìn)行了重組表達(dá)與純化,并首次證明了K37重組蛋白同樣具備良好的止血性能。然而,人發(fā)角蛋白K37序列中有效的止血功能區(qū)域并不明確,并且由于角蛋白天然不可溶,重組角蛋白也為不溶性的包涵體。因此,研究人發(fā)角蛋白的止血功能區(qū)域以及通過基因改造提高重組角蛋白的溶解性對(duì)于新型止血蛋白材料的開發(fā)與設(shè)計(jì)具有重要意義。本課題通過截取重組角蛋白K37中序列最長(zhǎng)、包含氨基酸信息最全面的第三個(gè)α-螺旋結(jié)構(gòu)即K37-3α序列作為研究模型,并通過基因改造得到了CMK37-3α序列以增加重組角蛋白的可溶性,并利用重組蛋白異源表達(dá)技術(shù)對(duì)K37-3α及CMK37-3α兩種重組蛋白進(jìn)行了表達(dá)、純化與理化表征。再采用靜電紡絲技術(shù)與涂層法制備了一種新型的止血敷料—重組角蛋白/聚己內(nèi)酯纖維復(fù)合膜,進(jìn)而來考查K37-3α及CMK37-3α重組角... 

【文章頁(yè)數(shù)】：86 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
英漢縮略名詞對(duì)照表
1 緒論
    1.1 止血材料的概述
    1.2 人發(fā)角蛋白的止血應(yīng)用
    1.3 人發(fā)重組角蛋白的概述
    1.4 重組角蛋白K37 的概述
    1.5 科學(xué)問題的提出及研究意義
    1.6 課題主要內(nèi)容及技術(shù)路線
2 功能區(qū)域的截取、表達(dá)純化及表征
    2.1 引言
    2.2 材料與儀器
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 主要試劑的配制
        2.3.2 K37 角蛋白功能區(qū)域的選取
        2.3.3 K37-3α重組角蛋白的表達(dá)與純化
        2.3.4 基因測(cè)序鑒定
        2.3.5 生物信息學(xué)分析預(yù)測(cè)
        2.3.6 蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
        2.3.7 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳
        2.3.8 基質(zhì)輔助激光解析串聯(lián)飛行時(shí)間質(zhì)譜
        2.3.9 紫外全波長(zhǎng)掃描光譜檢測(cè)
        2.3.10 傅里葉變換紅外光譜檢測(cè)
        2.3.11 圓二色光譜檢測(cè)
        2.3.12 X-射線衍射檢測(cè)
        2.3.13 統(tǒng)計(jì)分析
    2.4 結(jié)果與討論
        2.4.1 基因測(cè)序驗(yàn)證分析
        2.4.2 生物信息學(xué)分析
        2.4.3 K37-3α重組角蛋白產(chǎn)量分析
        2.4.4 K37-3α重組角蛋白的理化性質(zhì)分析
    2.5 小結(jié)
3 功能區(qū)域的改造、表達(dá)純化及表征
    3.1 引言
    3.2 材料與儀器
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 主要試劑的配制
        3.3.2 功能區(qū)域改造
        3.3.3 CMK37-3α重組蛋白的表達(dá)與純化
        3.3.4 基因測(cè)序鑒定
        3.3.5 生物信息學(xué)分析預(yù)測(cè)
        3.3.6 蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
        3.3.7 CMK37-3α重組蛋白的理化性質(zhì)檢測(cè)
        3.3.8 統(tǒng)計(jì)分析
    3.4 結(jié)果與討論
        3.4.1 基因測(cè)序驗(yàn)證分析
        3.4.2 生物信息學(xué)分析
        3.4.3 CMK37-3α重組角蛋白的產(chǎn)量分析
        3.4.4 CMK37-3α重組角蛋白的理化性質(zhì)分析
    3.5 小結(jié)
4 重組角蛋白/聚己內(nèi)酯纖維復(fù)合膜的制備及性能研究
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 重組角蛋白/聚己內(nèi)酯紡絲復(fù)合膜的制備
        4.3.2 掃描電鏡(SEM)檢測(cè)
        4.3.3 傅里葉變換紅外光譜檢測(cè)
        4.3.4 X-射線衍射檢測(cè)
        4.3.5 力學(xué)性能檢測(cè)
        4.3.6 親水性能檢測(cè)
        4.3.7 體外促凝血實(shí)驗(yàn)
        4.3.8 體內(nèi)止血實(shí)驗(yàn)
        4.3.9 統(tǒng)計(jì)分析
    4.4 結(jié)果與討論
        4.4.1 SEM分析
        4.4.2 FTIR-ATR分析
        4.4.3 晶型結(jié)構(gòu)分析
        4.4.4 力學(xué)性能分析
        4.4.5 潤(rùn)濕性能分析
        4.4.6 體外促凝血實(shí)驗(yàn)分析
        4.4.7 體內(nèi)止血實(shí)驗(yàn)分析
    4.5 小結(jié)
5 重組角蛋白/聚己內(nèi)酯纖維復(fù)合膜的細(xì)胞相容性
    5.1 引言
    5.2 實(shí)驗(yàn)材料與儀器
        5.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
    5.3 實(shí)驗(yàn)方法
        5.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        5.3.2 細(xì)胞的接種
        5.3.3細(xì)胞的毒性實(shí)驗(yàn)
        5.3.4 細(xì)胞的死活鑒定
        5.3.5 細(xì)胞的增殖檢測(cè)
        5.3.6 細(xì)胞的形態(tài)觀察
        5.3.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    5.4 結(jié)果與討論
        5.4.1 細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)
        5.4.2 細(xì)胞毒性分析
        5.4.3 細(xì)胞死活染色分析
        5.4.4 細(xì)胞的增殖分析
        5.4.5 細(xì)胞形態(tài)分析
    5.5 小結(jié)
6 全文總結(jié)與后續(xù)工作建議
    6.1 全文主要結(jié)論
    6.2 后續(xù)工作建議
參考文獻(xiàn)
附錄
    A.作者在攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文
    B.作者在攻讀碩士學(xué)位期間參與的科研項(xiàng)目
    C.學(xué)位論文數(shù)據(jù)集:
致謝



本文編號(hào)：3654577