【目的】目前,國(guó)內(nèi)外大麥遺傳轉(zhuǎn)化主要利用Golden Promise品種,基因依賴性嚴(yán)重,尤其是大麥的轉(zhuǎn)化效率較低,并且獲得安全型轉(zhuǎn)基因大麥植株對(duì)其進(jìn)一步產(chǎn)業(yè)化非常重要。建立高效、無(wú)篩選標(biāo)記大麥遺傳轉(zhuǎn)化體系,拓展大麥遺傳轉(zhuǎn)化的受體基因型,為大麥基因功能解析和大麥轉(zhuǎn)基因育種及商業(yè)化種植提供技術(shù)保障�！痉椒ā恳詢�(yōu)良大麥品種Vlamingh為受體,取開花授粉后14 d左右的幼胚為轉(zhuǎn)化材料,通過(guò)對(duì)培養(yǎng)基成分及培養(yǎng)步驟優(yōu)化,建立農(nóng)桿菌介導(dǎo)的高效遺傳轉(zhuǎn)化體系,并利用該體系將Bar和GUS在不同T-DNA區(qū)段的雙T-DNA表達(dá)載體pWMB123轉(zhuǎn)化大麥,獲得候選轉(zhuǎn)基因植株,然后利用PCR、Bar試紙條、組織化學(xué)染色和Southern blot等檢測(cè)方法,在T1代轉(zhuǎn)基因植株中成功獲得無(wú)篩選標(biāo)記大麥轉(zhuǎn)基因植株。【結(jié)果】在愈傷組織分化階段,發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基中添加1.0 mg·L^-1 KT、0.5 mg·L^-1 6-BA和0.05 mg·L^-1 NAA明顯促進(jìn)愈傷組織分化。在轉(zhuǎn)基因植株生根階段,發(fā)現(xiàn)采用添加1.0 mg·L^-1... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué). 2020,53(18)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：12 頁(yè)

【文章目錄】：
0 引言
1 材料與方法
    1.1 植物材料和表達(dá)載體
    1.2 培養(yǎng)基
    1.3 農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化大麥幼胚
        1.3.1 取樣和滅菌
        1.3.2 農(nóng)桿菌侵染和共培養(yǎng)
        1.3.3 愈傷組織的誘導(dǎo)
        1.3.4 愈傷組織的分化，轉(zhuǎn)基因苗的生根及移栽
    1.4 T0代轉(zhuǎn)基因植株的鑒定
    1.5 T1代中無(wú)篩選標(biāo)記轉(zhuǎn)基因植株篩選
    1.6 Southern blot雜交
2 結(jié)果
    2.1 不同培養(yǎng)基對(duì)大麥愈傷組織分化植株和生根的影響
    2.2 大麥轉(zhuǎn)基因T0代陽(yáng)性植株的獲得和檢測(cè)
    2.3 T1代中無(wú)篩選標(biāo)記轉(zhuǎn)基因大麥植株的獲得
3 討論
    3.1 大麥遺傳轉(zhuǎn)化體系優(yōu)化
    3.2 無(wú)篩選標(biāo)記轉(zhuǎn)基因大麥植株獲得效率
    3.3 獲得無(wú)篩選標(biāo)記轉(zhuǎn)基因植物的意義
4 結(jié)論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]利用RNAi抑制B-hordein合成降低大麥籽粒蛋白質(zhì)含量[J]. 李靜雯,張正英,令利軍,李淑潔.  中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué). 2014(19)
[3]大麥蘇啤4號(hào)幼胚愈傷組織的誘導(dǎo)及植株的高頻再生[J]. 余桂紅,張旭,孫曉波,馬鴻翔.  江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào). 2013(05)
[4]西北地區(qū)特色大麥品種成熟胚離體培養(yǎng)的初步研究[J]. 王興珍,林國(guó)梁,賴勇,楊軻,孟亞雄,李葆春,馬小樂,尚勛武,王化俊.  麥類作物學(xué)報(bào). 2013(02)
[5]優(yōu)良大麥品種花30幼胚遺傳轉(zhuǎn)化體系的優(yōu)化[J]. 高潤(rùn)紅,杜志釗,郭桂梅,鄒磊,何婷,陳志偉,李梁,陸瑞菊,黃劍華.  植物遺傳資源學(xué)報(bào). 2012(05)
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[7]小麥轉(zhuǎn)基因方法及其評(píng)述[J]. 葉興國(guó),陳明,杜麗璞,徐惠君.  遺傳. 2011(05)
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[10]大麥成熟胚愈傷組織的誘導(dǎo)和植株再生的研究[J]. 郭曉琳,張紅偉,劉欣潔,劉亞娟,張鋒,孫東發(fā),譚振波.  植物遺傳資源學(xué)報(bào). 2005(04)

碩士論文
[1]農(nóng)桿菌介導(dǎo)miR396基因?qū)Υ篼溣鷤M織的遺傳轉(zhuǎn)化[D]. 馬春業(yè).華中農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016
[2]TrxS的表達(dá)及其對(duì)啤酒大麥發(fā)芽種子水解酶和貯藏物質(zhì)降解的影響[D]. 孔維威.河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006



本文編號(hào)：3640107