自然界的植物為了滿足生長與發(fā)育的需求可以根據(jù)外部環(huán)境的變化來相應(yīng)地驅(qū)動(dòng)特定基因在某組織部位表達(dá),從而適應(yīng)復(fù)雜且不斷變化的生長環(huán)境。啟動(dòng)子是DNA序列中可以起始轉(zhuǎn)錄、識(shí)別RNA聚合酶并結(jié)合DNA,位于結(jié)構(gòu)基因5’端上游區(qū)域啟動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄的一段序列。植物基因啟動(dòng)子中有多種重要順式作用元件,這些元件在轉(zhuǎn)錄水平上參與調(diào)節(jié)相應(yīng)下游基因的表達(dá),從而使植物可以抵抗外界環(huán)境的脅迫而更好的生長發(fā)育。據(jù)研究,當(dāng)植物中啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄調(diào)控受到影響后,有可能會(huì)引起基因表達(dá)甚至?xí)蛊渖L發(fā)育出現(xiàn)不良反應(yīng),所以研究植物啟動(dòng)子對(duì)于我們更好的了解基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控的表達(dá)模式及其調(diào)控機(jī)制是非常重要的。本實(shí)驗(yàn)室以前的研究發(fā)現(xiàn)擬南芥β-葡萄糖苷酶19（Beta-glucosidase,BGLU19）基因啟動(dòng)子是具有種子特異性表達(dá)的啟動(dòng)子,它可以控制外源基因在植物種子中高效表達(dá)而非植物的其他部位中表達(dá),以及避免在轉(zhuǎn)基因植株中非特異表達(dá)所引起的能量負(fù)荷和物質(zhì)浪費(fèi),減少對(duì)植物的不利影響。本研究將從分子水平上通過對(duì)AtBGLU19啟動(dòng)子進(jìn)行缺失突變繼而獲得轉(zhuǎn)基因擬南芥純合體,以此來確定決定種子特異性表達(dá)元件和關(guān)鍵DNA區(qū)域,以及研究β-葡萄糖苷... 

【文章來源】：曲阜師范大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞
第一章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 β-葡糖苷酶概述
        1.1.1 β-葡糖苷酶及其結(jié)構(gòu)特性
        1.1.2 β-葡糖苷酶的來源及研究進(jìn)展
        1.1.3 β-葡糖苷酶的理化性質(zhì)
        1.1.4 β-葡糖苷酶的功能及應(yīng)用
        1.1.5 β-葡糖苷酶的基因結(jié)構(gòu)的研究
    1.2 植物啟動(dòng)子的研究進(jìn)展
        1.2.1 植物啟動(dòng)子概念
        1.2.2 植物啟動(dòng)子的結(jié)構(gòu)特征
        1.2.3 啟動(dòng)子的類型及功能
        1.2.4 啟動(dòng)子的研究方法
    1.3 主要研究內(nèi)容與研究意義
第二章 實(shí)驗(yàn)材料和方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 擬南芥及培養(yǎng)材料
        2.1.2 菌株
        2.1.3 載體
        2.1.4 生化試劑及酶
        2.1.5 相關(guān)引物的合成及測(cè)序
        2.1.6 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.7 常用溶液、培養(yǎng)基及GUS染色液的配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 CTAB法提取擬南芥基因組DNA
        2.2.2 AtBGLU19啟動(dòng)子缺失片段克隆載體的構(gòu)建
        2.2.3 AtBGLU19啟動(dòng)子缺失片段表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.4 表達(dá)載體轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌
        2.2.5 浸花法侵染擬南芥
        2.2.6 轉(zhuǎn)基因擬南芥植株的篩選
        2.2.7 轉(zhuǎn)基因純系擬南芥GUS組織化學(xué)染色
第三章 結(jié)果與分析
    3.1 AtBGLU19啟動(dòng)子及缺失啟動(dòng)子組織特異性元件分析
        3.1.1 AtBGLU19啟動(dòng)子序列組織特異性元件分析
        3.1.2 AtBGLU19啟動(dòng)子及各缺失啟動(dòng)子缺失突變分析
    3.2 AtBGLU19啟動(dòng)子缺失克隆載體構(gòu)建
        3.2.1 缺失片段PCR擴(kuò)增
        3.2.2 缺失克隆載體構(gòu)建
    3.3 AtBGLU19啟動(dòng)子缺失表達(dá)載體的構(gòu)建
        3.3.1 表達(dá)載體的菌落PCR擴(kuò)增
        3.3.2 表達(dá)載體雙酶切鑒定
    3.4 轉(zhuǎn)基因擬南芥純合株系的獲得及GUS組織化學(xué)染色
        3.4.1 轉(zhuǎn)基因擬南芥純合株系的獲得
        3.4.2 AtBGLU19啟動(dòng)子與缺失啟動(dòng)子的GUS組織化學(xué)染色
第四章 結(jié)論與討論
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]植物組織特異性啟動(dòng)子研究進(jìn)展[J]. 焦勇,柳小慶,江海洋,陳茹梅.  中國農(nóng)業(yè)科技導(dǎo)報(bào). 2019(01)
[2]產(chǎn)纖維素酶菌株的研究進(jìn)展[J]. 廖春蓉,郭雅蓉.  職業(yè)與健康. 2016(19)
[3]微生物纖維素酶的研究概況及應(yīng)用前景[J]. 張鳳梅.  青海畜牧獸醫(yī)雜志. 2016(03)
[4]華山松凋落針葉上的真菌多樣性及4株真菌的纖維素分解能力[J]. 許秀蘭,楊春琳,田莎,姜欣華,劉韓,劉應(yīng)高.  林業(yè)科學(xué). 2016(01)
[5]植物誘導(dǎo)型啟動(dòng)子及相關(guān)順式作用元件研究進(jìn)展[J]. 李濯雪,陳信波.  生物技術(shù)通報(bào). 2015(10)
[6]植物啟動(dòng)子研究進(jìn)展[J]. 李田,孫景寬,劉京濤.  生物技術(shù)通報(bào). 2015(02)
[7]穿膜肽-β-葡萄糖苷酶偶聯(lián)物的制備及活性鑒定[J]. 王光文,周潔,王啟輝,劉云龍.  山東醫(yī)藥. 2013(38)
[8]產(chǎn)β-葡萄糖苷酶真菌的篩選鑒定、純化及酶學(xué)性質(zhì)分析[J]. 陳靜,郝偉偉,王春梅,陳惠,吳琦,韓學(xué)易.  食品科學(xué). 2013(05)
[9]β-葡萄糖苷酶I、L-6和IL-12在診斷新生兒壞死性小腸結(jié)腸炎中的應(yīng)用價(jià)值[J]. 李曉霞.  中國現(xiàn)代醫(yī)生. 2012(23)
[10]產(chǎn)β-葡萄糖苷酶微生物育種研究進(jìn)展[J]. 石彩蕊,王義強(qiáng),陳介南,張偉濤.  生物技術(shù)通報(bào). 2011(03)

碩士論文
[1]擬南芥β-葡糖苷酶19基因啟動(dòng)子的克隆及功能初析[D]. 陳慧清.曲阜師范大學(xué) 2016
[2]β-葡萄糖苷酶基因的克隆及其表達(dá)[D]. 潘海芳.福建師范大學(xué) 2006



本文編號(hào)：3630742