發(fā)布時(shí)間：2022-02-17 22:57

　　野油菜黃單胞菌野菜致病變種（Xanthomonas campestris pv.campestris,Xcc）是嚴(yán)重威脅十字花科植物的重要病原真菌之一,可造成全世界范圍內(nèi)農(nóng)業(yè)的嚴(yán)重減產(chǎn)。DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶是通過(guò)調(diào)節(jié)DNA的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)進(jìn)而影響DNA復(fù)制、重組和轉(zhuǎn)錄過(guò)程。目前尚未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道有關(guān)病原細(xì)菌中拓?fù)洚悩?gòu)酶功能研究。為分析拓?fù)洚悩?gòu)酶是否影響野油菜黃單胞菌野菜致病變種的致病性,本實(shí)驗(yàn)以Xcc 8004中Xcc₀034基因,預(yù)測(cè)編碼的TopoIB蛋白作為研究對(duì)象,通過(guò)對(duì)TopoIB蛋白的理化性質(zhì)進(jìn)行初步的生物信息學(xué)分析,表明TopoIB蛋白含有核定位信號(hào)和信號(hào)肽。在農(nóng)桿菌介導(dǎo)煙草葉片中瞬時(shí)表達(dá),發(fā)現(xiàn)p1305-GFPTopoIB融合蛋白定位于煙草葉片的細(xì)胞核上。構(gòu)建topoIB基因的原核表達(dá)載體,純化的TopoIB重組蛋白反應(yīng)15 min可以完全解旋超螺旋DNA,表明TopoIB蛋白具有拓?fù)洚悩?gòu)酶活性。將topoIB基因突變后得到突變體ATopoIB,表型檢測(cè)結(jié)果顯示,ΔTopoIB菌株與野生型Xcc 8004在植物體內(nèi)和培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)狀況無(wú)明顯差異,且胞外多糖產(chǎn)量基本... 

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