脂質參與調控昆蟲蟲體的水分平衡,對維持昆蟲正常的生理活動,尤其是抵抗高溫干旱等不良環(huán)境脅迫有著重要作用。載脂蛋白D（Apolipoprotein D,Apo D）以及極低密度脂蛋白（Very low density lipoprotein,VLDLR）在昆蟲的脂質代謝與運輸過程中發(fā)揮重要作用。本文擬通過基因克隆、定量PCR以及RNAi等,對黃粉蟲Tm Apo D與Tm VLDLR基因的表達特征以及基因功能進行研究,探索這兩個基因與黃粉蟲蟲體水分平衡之間的關系,為提高黃粉蟲在人工飼養(yǎng)過程中對濕度等外界條件的適應能力奠定基礎。本論文得到的試驗結果如下:擴增得到包含基因全長c DNA的Tm Apo D與Tm VLDLR基因。基因表達特征研究結果表明Tm Apo D與Tm VLDLR基因分別在脂肪體與頭部高表達,與其它組織部位存在顯著差異;其次Tm Apo D與Tm VLDLR基因分別在雌成蟲期與1齡幼蟲期高表達,與其它發(fā)育階段存在顯著差異。表明黃粉蟲Tm Apo D與Tm VLDLR基因的表達具有組織特異性以及發(fā)育階段特異性。低濕度脅迫導致黃粉蟲Tm Apo D基因的相對表達量極顯著高于對照... 

【文章來源】：浙江農林大學浙江省

【文章頁數(shù)】：67 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

耐旱脅迫裝置圖

黃粉蟲TmApoD與TmVLDLR基因表達特征與影響蟲體水分平衡的研究202.2.9試驗數(shù)據(jù)分析定量PCR的數(shù)據(jù)采用2－ΔΔct計算基因的相對表達量，結果以方差±標準誤表示，采用單因素方差分析方法，Turkey’s法進行多重比較，P<0.05表示差異顯著，P>0.05表示差異不顯著。除定量PCR以外的數(shù)據(jù)，如死亡率、失水率以及日失重量等結果以方差±標準誤表示，采用T檢驗分析方法，P<0.01表示差異極顯著，P>0.01表示差異不顯著。2.3結果與分析2.3.1黃粉蟲TmApoD基因序列分析從黃粉蟲轉錄組數(shù)據(jù)中，通過篩選，比對獲取目的基因序列，并通過設計引物，調整PCR條件等擴增得到TmApoD基因的ORF片段（圖2.2）。圖2.2TmApoD基因擴增條帶Figure2.2PCRamplificationofORFofTmApoDgene注：泳道1：DL2000Maker；泳道2：TmApoD基因（693bp）TmApoD基因ORF以ATG為起始密碼子，TGA為終止密碼子（圖2.3）。信號肽預測結果表明，TmApoD基因含有16個氨基酸的信號肽區(qū)域，為分泌蛋白（圖2.4）。

黃粉蟲TmApoD基因表達與功能研究21圖2.3TmApoD基因核苷酸與氨基酸序列分析Figure2.3NucleotideacidanddeducedaminoacidsequencesofTmApoDgene注：黃色突出顯示的為信號肽區(qū)域；紅色字體下劃線標出的為半胱氨酸。圖2.4TmApoD基因信號肽預測Figure2.4SignalpeptidepredictionofTmApoDgeneTmApoD基因全長693bp，編碼230個氨基酸，理化性質分析結果如表2.13所示：TmApoD基因去除信號肽的蛋白分子量為23.4kDa，帶28個負電荷殘疾（Asp+Glu），23個正電荷殘基（Arg+Lys）。等電點為5.08，不穩(wěn)定系數(shù)為29.27，脂肪族氨基酸指數(shù)為72.52，總疏水系數(shù)為-0.328，為親水性穩(wěn)定蛋白。

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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本文編號：3624866