棉花（Gossypium hirsutum L.）是我國重要的纖維作物和油料作物,其無限生長的特性是導(dǎo)致棉纖維產(chǎn)量降低、質(zhì)量變差原因之一。生長素是一類重要的植物生長激素,參與調(diào)節(jié)植物生長發(fā)育的許多過程。生長素/吲哚乙酸蛋白（auxin/indoleacetic acids proteins,Aux/IAAs）是生長素信號途徑中的關(guān)鍵蛋白,但它在棉花生長發(fā)育中的調(diào)控作用及機理還不清楚。本研究利用病毒誘導(dǎo)的基因沉默技術(shù)（virus-induced gene silencing,VIGS）初步探究棉花營養(yǎng)生長期特異表達的Aux/IAA家族某些基因的功能,主要結(jié)果如下:1.本研究利用RT-PCR從棉花中獲得Aux/IAA家族中GhAux1、GhAux3、GhAux6和GhAux7四個基因的cDNA片段,經(jīng)EcoRI/KpnI雙酶切后分別連入pTRV-RNA2載體,構(gòu)建并獲得重組質(zhì)粒病毒載體,之后分別轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌,并注射棉花幼苗子葉。農(nóng)桿菌注射后7天,采用Real-time PCR檢測發(fā)現(xiàn)GhAux1、GhAux3、GhAux6和GhAux7在相應(yīng)沉默植株中的表達量分別較空載體對照下調(diào)了73.9%... 

【文章來源】：河南師范大學(xué)河南省

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

目的基因克隆與重組質(zhì)粒的雙酶切鑒定Fig.3-1Cloneofdestinationgeneanddoubledigestionanalysis注：M：DL2000;（B）1，2，3和4分別是pTRV-GhAux1、pTRV-GhAux3、pTRV-GhAux6

棉花 Aux/IAA 家族基因功能的初步探究3.1.2 GhAuxs 在棉花幼苗中沉默效率的檢測pTRV-GhCLA1 作為干擾效率的對照組，pTRV-00 作為空載體對照組。當(dāng)注射含pTRV-GhCLA1 農(nóng)桿菌的棉花幼苗的葉片顯現(xiàn)明顯的白化時，表明 GhCLA1 被成功沉默。當(dāng) pTRV-GhCLA1 棉花幼苗葉片白化出現(xiàn)一周時，采用 Real-time PCR 分別檢測沉默棉花幼苗中 GhAux1、GhAux3、GhAux6 和 GhAux7 基因的相對表達水平。如圖 3-2，與空載體 pTRV-00 植株相比，GhAuxs 在相應(yīng)的沉默植株中的相對表達量均顯著下調(diào)，其中GhAux1、GhAux3、GhAux6 和 GhAux7 的相對表達量分別下調(diào) 73.9%、66.8%、60.8%和51.6%，由此，本試驗分別成功獲得了 GhAux1、GhAux3、GhAux6 和 GhAux7 沉默的棉花植株。

26圖 3-3 GhAux1 沉默的棉花幼苗的生長狀況Fig.3-3 Phenotype of GhAux1-silenced cotton seedlings（A）：注射農(nóng)桿菌 15 天時棉花幼苗；（B）：GhAux1 沉默的棉花幼苗的株高；（C）：GhAux1 沉默的棉花幼苗的株高日增量。數(shù)據(jù)為平均值±SD；“*”代表差異顯著(P<0.05) ；“**”代表差異極顯著(P<0.01)。Note：（A）：Photos taken in the 15 days after the injection by pTRV-GhCLA1、pTRV-00 and pTRV-GhAux1；（B）：Plant height of GhAux1-silenced cotton seedlings；（C）：Plant height increase per day afterGhAux1-silenced in cotton seedlings. Data are means±SD ,“*”represent significant difference betweenpTRV-GhAux1 and pTRV-00 groups(P<0.05) ,“**”represent very significant difference betweenpTRV-GhAux1 and pTRV-00 groups(P<0.01).

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3588082