目的克隆并構(gòu)建葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1（GLUT1）啟動(dòng)子的熒光素酶報(bào)告基因載體并檢測(cè)其活性。方法以ZR75-1細(xì)胞提取的基因組為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增,將獲得的GLUT1啟動(dòng)子片段酶切后連接至熒光素酶報(bào)告載體pGL4-basic中,重組質(zhì)粒pGL4-basic-GLUT1經(jīng)測(cè)序正確后與空載體分別轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,并檢測(cè)啟動(dòng)子活性;再將pGL4-basic-GLUT1同myc-HIF1α或?qū)φ召|(zhì)粒pXJ-40-myc轉(zhuǎn)染ZR75-1細(xì)胞,分別在高糖和低糖條件下培養(yǎng),檢測(cè)啟動(dòng)子活性,探討低氧誘導(dǎo)因子1α（HIF1α）對(duì)GLUT1啟動(dòng)子活性的影響。結(jié)果 DNA測(cè)序顯示,擴(kuò)增片段與GLUT1啟動(dòng)子片段的序列一致。熒光素酶活性實(shí)驗(yàn)顯示,轉(zhuǎn)染pGL4-basic-GLUT1后,GLUT1啟動(dòng)子較對(duì)照組有較高活性（P<0.001）;低糖條件下,pGL4-basic-GLUT1與myc-HIF1α共轉(zhuǎn)染,GLUT1啟動(dòng)子活性更強(qiáng)（P=0.042）。結(jié)論成功構(gòu)建了GLUT1啟動(dòng)子報(bào)告基因載體,明確了HIF1α在高糖和低糖條件下對(duì)GLUT1啟動(dòng)子活性的增強(qiáng)作用,為深入研究GLUT1在腫瘤細(xì)胞代謝中的作用奠定了... 

【文章來(lái)源】：軍事醫(yī)學(xué). 2020,44(07)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：5 頁(yè)

【部分圖文】：

PCR擴(kuò)增人GLUT1啟動(dòng)子序列

重組質(zhì)粒的雙酶切鑒定

為觀察HIF1α對(duì)GLUTI啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性的作用，分別在高糖和低糖條件下培養(yǎng)ZR75-1細(xì)胞，測(cè)定GLUT1啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性。經(jīng)三因素方差分析，轉(zhuǎn)染質(zhì)粒pGL4-basic-GLUT1、myc-HIF1α以及低葡萄糖濃度均可促進(jìn)啟動(dòng)子活性（P<0.001），且pGL4-basic-GLUT1與myc-HIF1α、pGL4-basic-GLUT1與葡萄糖濃度之間均存在一階交互作用（P<0.001),pGL4-basic-GLUT1、myc-HIF1α與葡萄糖濃度三者之間存在二階交互作用（P=0.042），按α=0.05水準(zhǔn)，可認(rèn)為myc-HIF1α能明顯促進(jìn)pGL4-basic-GLUT1的作用，增強(qiáng)啟動(dòng)子活性，低葡萄糖濃度亦如此；在低糖濃度下，myc-HIF1α與pGL4-basic-GLUT1共轉(zhuǎn)染，GLUT1啟動(dòng)子活性更強(qiáng)（圖4）。圖4 HIF1α增強(qiáng)GLUT1啟動(dòng)子活性（n=3)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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