斑馬魚（Danio rerio）長非編碼RNA（long non-coding RNA,lnc RNA）基因Nondret002679與人（Homo sapiens）腫瘤相關(guān)基因間長非編碼RNA682基因LNC-PHOX2B-2具有同源序列。本研究以斑馬魚為模型,利用成簇規(guī)律間隔短回文重復(fù)序列/成簇規(guī)律間隔短回文重復(fù)序列關(guān)聯(lián)蛋白9（clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein 9,CRISPR/Cas9）系統(tǒng),敲除預(yù)測的Nondret002679基因啟動子區(qū)以沉默Nondret002679基因的表達,研究lnc RNA基因Nondret002679在斑馬魚中的調(diào)控功能。首先利用啟動子區(qū)上下游序列設(shè)計靶向不同位點的向?qū)NA（guide RNA）g R1、g R2、g R3、g R4、g R5和g R6。人工合成g RNA轉(zhuǎn)錄模板,體外轉(zhuǎn)錄為g RNA,與Cas9 m RNA一起顯微注射到斑馬魚卵中。PCR鑒定28尾2月齡斑馬魚發(fā)現(xiàn),11尾發(fā)生敲除,敲除率為39%。繁... 

【文章來源】：農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報. 2016,24(05)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 靶位點的選擇
        1.2.2 g RNA轉(zhuǎn)錄模板合成
        1.2.3 Cas9 m RNA的體外轉(zhuǎn)錄
        1.2.4 g RNA體外轉(zhuǎn)錄
        1.2.5 顯微注射及敲除檢測
        1.2.6 純合lnc RNA啟動子區(qū)敲除鑒定
2 結(jié)果與分析
    2.1 早期斑馬魚敲除結(jié)果鑒定
    2.2 2月齡斑馬魚敲除結(jié)果鑒定
    2.3 純合lnc RNA啟動子區(qū)敲除的獲得
3 討論
4 結(jié)論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]CRISPR/Cas技術(shù)研究進展[J]. 常振儀,嚴(yán)維,劉東風(fēng),陳竹鋒,謝剛,盧嘉威,吳建新,唐曉艷.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報. 2015(09)



本文編號：3563807