本文關(guān)鍵詞：核盤菌轉(zhuǎn)錄因子Ss-Fkh1基因功能研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：核盤菌(Sclerotinia sclerotiorum(Lib.)de Bary)在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上經(jīng)常造成巨大的經(jīng)濟損失,可在全球范圍內(nèi)引發(fā)菌核病,因寄主范圍廣泛,可引起多種寄主減產(chǎn)甚至絕產(chǎn)。核盤菌為絲狀真菌,菌絲聚集而形成菌核,使核盤菌度過不良環(huán)境,同時菌核也是核盤菌由無性生殖過度到有性生殖過程中重要的生理結(jié)構(gòu),因而對于菌核的防治成為控制該病害的關(guān)鍵。Forkhead-box轉(zhuǎn)錄因子家族在生命體成熟過程中有不可替代的功能,在生長發(fā)育、細胞分裂以及真菌致病性等多方面都起到重要的調(diào)節(jié)作用,因而對于該轉(zhuǎn)錄因子家族的研究顯得非常有必要。本研究中克隆得到Forkhead-box轉(zhuǎn)錄因子家族中的Ss-Fkh1基因,分別用沉默載體p Silent、p Silent-Dual構(gòu)建了沉默重組質(zhì)粒,并利用原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化的方法將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入到核盤菌中,經(jīng)相應(yīng)抗性平板上的三次純化篩選后,提取陽性轉(zhuǎn)化子的DNA,在以所得到的DNA為模板克隆相應(yīng)抗性基因,通過q RT-PCR分析Ss-Fkh1在不同沉默子中的表達量,實驗結(jié)果顯示與野生菌株不同,Ss-Fkh1在沉默子中的表達量均有下調(diào),但不同的沉默子下降的程度有所不同。將得到的沉默轉(zhuǎn)化子接種到PDA上進行培養(yǎng)七天后觀察,與野生型菌株相比,沉默轉(zhuǎn)化子單位時間內(nèi)的生長量明顯變慢,甚至不能鋪滿整個玻璃培養(yǎng)皿。菌絲形態(tài)觀察結(jié)果表明,有些沉默轉(zhuǎn)化子其菌絲分支角度不再是銳角,而是直角,與野生菌株有所區(qū)別。番茄葉片離體測試數(shù)據(jù)同樣表明,沉默轉(zhuǎn)化子的致病能力與野生菌株相比有不同程度減弱。野生型核盤菌與沉默轉(zhuǎn)化子土豆泥培養(yǎng)基對峙培養(yǎng)7天后可以明顯的看到當(dāng)野生型核盤菌已經(jīng)形成成熟的菌核時,此時沉默轉(zhuǎn)化子仍然沒有任何菌核的形成。q RT-PCR檢測與黑色素形成相關(guān)基因在沉默轉(zhuǎn)化子中的表達量,與野生型核盤菌相比轉(zhuǎn)化子中目的基因的表達量大幅度下降,而核盤菌菌核的形成需要黑色素的沉積,如果沒有黑色素的沉積則無法形成正常的菌核,如果沒有菌核參與到核盤菌的生活史,由核盤菌引起植物病害的幾率將會大大的降低,逆境生長速率測定結(jié)果表明沉默轉(zhuǎn)化子對于逆境的耐性弱于野生型核盤菌。本研究通過基因沉默的方法研究Ss-Fkh1基因在核盤菌菌絲生長,菌落形態(tài),致病性、菌核形成等過程中的功能以及對逆境的抵抗能力,為核盤菌的防治提供科學(xué)依據(jù)和理論支持。
【關(guān)鍵詞】：核盤菌 轉(zhuǎn)錄因子 Ss-Fkh1 基因沉默 菌核
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S432.44
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-12
• 第一章 文獻綜述12-25
• 1 核盤菌簡介12-17
• 1.1 核盤菌的分類，生活史及其侵染循環(huán)13-15
• 1.2 菌核病病害癥狀15-16
• 1.3 菌核病的危害及防治16-17
• 2 核盤菌菌核發(fā)育17-20
• 2.1 影響核盤菌菌核發(fā)育的因素18-20
• 3 絲狀真菌基因功能研究進展20-23
• 3.1 RNA干擾技術(shù)20-22
• 3.2 轉(zhuǎn)座子標(biāo)簽技術(shù)22
• 3.3 超表達技術(shù)22
• 3.4 基因敲除22-23
• 4 Forkhead-box轉(zhuǎn)錄因子研究進展23-24
• 5 本研究的目的和意義24-25
• 第二章 核盤菌Ss-Fkh1基因克隆及RNA干擾載體的構(gòu)建25-37
• 1 材料25-26
• 1.1 菌株及載體25
• 1.2 主要儀器25
• 1.3 主要試劑25-26
• 1.4 培養(yǎng)基配制及試劑配制26
• 2 方法26-33
• 2.1 Ss-Fkh1基因克隆26-31
• 2.2 Ss-Fkh1 RNA干擾載體的構(gòu)建31-33
• 2.3 Ss-Fkh1 RNA干擾載體的驗證33
• 3 結(jié)果與分析33-35
• 3.1 PCR克隆連入兩種載體的Ss-Fkh1片段33-34
• 3.2 重組質(zhì)粒酶切鑒定結(jié)果34-35
• 4 小結(jié)35-37
• 第三章 篩選核盤菌Ss-Fkh1遺傳轉(zhuǎn)化子37-48
• 1 材料37-38
• 1.1 載體及菌株37
• 1.2 主要試劑37
• 1.3 主要試劑的配制37-38
• 2 方法38-43
• 2.1 制備核盤菌菌絲的原生質(zhì)體38-40
• 2.2 PEG-Ca Cl2介導(dǎo)核盤菌原生質(zhì)體的遺傳轉(zhuǎn)化40
• 2.3 2xCTAB提取液配制：40
• 2.4 pSD-Ss-Fkh1、p S1-Ss-Fkh1, 沉默轉(zhuǎn)化子的篩選40-41
• 2.5 轉(zhuǎn)化子PCR檢測41-43
• 3 結(jié)果與分析43-47
• 3.1 菌絲培養(yǎng)43-44
• 3.2 原生質(zhì)體制備44
• 3.3 轉(zhuǎn)化子PCR初步檢測44-47
• 4.小結(jié)47-48
• 第四章 轉(zhuǎn)錄因子Ss-Fkh1的功能驗證48-65
• 1 材料48-49
• 1.1 菌株48
• 1.2 主要試劑48
• 1.3 試劑配制48-49
• 2 方法49-53
• 2.1 野生型核盤菌中Ss-Fkh1表達量分析49
• 2.2 沉默轉(zhuǎn)化子菌絲形態(tài)觀察49
• 2.3 沉默轉(zhuǎn)化子菌落形態(tài)觀察49
• 2.4 沉默轉(zhuǎn)化子菌絲生長速率測定49-50
• 2.5 野生型核盤菌與沉默轉(zhuǎn)化子對峙培養(yǎng)50
• 2.6 黑色素相關(guān)基因表達量分析50-51
• 2.7 沉默轉(zhuǎn)化子致病力的測定51-52
• 2.8 沉默轉(zhuǎn)化子對過氧化氫耐力測定52
• 2.9 沉默轉(zhuǎn)化子對高鹽環(huán)境的耐力測定52-53
• 3 結(jié)果與分析53-63
• 3.1 野生型核盤菌中Ss-Fkh1表達量分析53
• 3.2 沉默轉(zhuǎn)化子菌絲形態(tài)觀察53-54
• 3.3 沉默轉(zhuǎn)化子菌落形態(tài)觀察結(jié)果54-55
• 3.4 沉默轉(zhuǎn)化子菌絲生長速率測定55-56
• 3.5 野生型核盤菌與沉默轉(zhuǎn)化子對峙培養(yǎng)56-57
• 3.6 黑色素相關(guān)基因表達量分析57-59
• 3.7 沉默轉(zhuǎn)化子致病力的測定59-60
• 3.8 沉默轉(zhuǎn)化子對過氧化氫耐力測定60-62
• 3.9 沉默轉(zhuǎn)化子對高鹽環(huán)境的耐力測定62-63
• 4 小結(jié)63-65
• 結(jié)論65-66
• 參考文獻66-71
• 致謝71-72

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

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4 石志琦,周明國,葉鐘音,史建榮,陳懷谷,王裕中;油菜菌核病菌對多菌靈的抗藥性監(jiān)測[J];江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報;2000年04期

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  本文關(guān)鍵詞：核盤菌轉(zhuǎn)錄因子Ss-Fkh1基因功能研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：355906