目的構(gòu)建小鼠Spata7基因視網(wǎng)膜內(nèi)敲除模型,探討Spata7基因突變導致光感受器細胞凋亡的機制。方法以腺相關(guān)病毒（AAV）為載體搭載CRISPR/Cas9系統(tǒng),注射1μL AAV病毒混合液（3×1013 vg/mL）于出生14 d小鼠視網(wǎng)膜中,對Spata7基因進行視網(wǎng)膜內(nèi)特異性敲除。1個月后行視網(wǎng)膜眼底照相觀察AAV感染效率;定量PCR測定敲除效率;視覺電生理檢測光感受器細胞功能;免疫熒光實驗探究Spata7基因功能。結(jié)果 AAV有效搭載CRISPR/Cas9系統(tǒng)進入視網(wǎng)膜內(nèi)并對Spata7基因進行敲除,敲除效率為54%。小鼠光感受器細胞大量死亡,導致整體光感受器細胞功能明顯下降。敲除后,視紫紅質(zhì)無法被轉(zhuǎn)運到光感受器細胞外節(jié),引起明顯的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激。結(jié)論 Spata7基因敲除導致視紫紅質(zhì)蛋白運輸?shù)酵夤?jié)受阻而停留在內(nèi)質(zhì)網(wǎng),并造成內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,是導致光感受器細胞大量死亡的重要原因。 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學學報. 2020,49(12)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

視網(wǎng)膜下腔注射1個月后實驗組小鼠眼底照相檢查結(jié)果

GFP與Cas9蛋白的免疫熒光染色結(jié)果

圖4 GFP與Cas9蛋白的免疫熒光染色結(jié)果本研究對Spata7基因視網(wǎng)膜內(nèi)敲除1個月后光感受器細胞的死亡機制進行了探討。結(jié)果顯示，RHO在實驗組小鼠AAV注射眼光感受器細胞內(nèi)節(jié)中呈高表達，提示RHO滯留在光感受器細胞ER內(nèi)。ER應(yīng)激標記蛋白CHOP在小鼠AAV注射眼光感受器細胞內(nèi)節(jié)中高表達，意味著RHO在ER內(nèi)的聚集引發(fā)了ER應(yīng)激。說明視網(wǎng)膜內(nèi)敲除Spata7基因后，RHO不能被轉(zhuǎn)運到光感受器細胞外節(jié)，而停留在了ER，造成了ER應(yīng)激，導致光感受器細胞凋亡。


本文編號：3554669