將體長5～7 cm的虎皮魚飼養(yǎng)在30 L的養(yǎng)殖缸中,每缸30尾。水溫自27℃起,每24 h降溫4℃,第4 d再降溫2℃,即各試驗組的水溫分別為23、19、15、13℃,對照組水溫保持27℃。每組3個平行。每組水溫維持24 h后,每缸隨機取3尾魚,用間氨基苯甲酸乙脂甲磺酸鹽溶液麻醉后,解剖腦、鰓、肝臟和肌肉組織,液氮速凍,-80℃超低溫冰箱保存?zhèn)溆谩＠肅ODEHOP軟件設(shè)計簡并引物,PCR擴增到一段虎皮魚硬脂酰輔酶A去飽和酶（SCD）基因（PtScd1基因）保守序列,用RACE克隆和序列拼接獲得PtScd1基因cDNA序列。試驗結(jié)果顯示,PtScd1基因cDNA序列全長1338 bp,ORFfinder預(yù)測開放閱讀框長度981個核苷酸,編碼326個氨基酸。根據(jù)保守結(jié)構(gòu)域數(shù)據(jù)庫預(yù)測PtSCD1蛋白氨基酸序列含有高度保守的脂肪酸去飽和酶結(jié)構(gòu)域,Swiss-Model同源建模發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)存在2個高度保守的鋅離子結(jié)合位點（可能與雙鐵離子結(jié)合）,2個配體結(jié)合位點,但是其序列保守性很差。PtSCD1蛋白可能在脂肪酸鏈delta9位置引入雙鏈,催化生成單不飽和脂肪酸。實時熒光定量PCR技術(shù)檢測... 

【文章來源】：水產(chǎn)科學. 2020,39(06)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：9 頁

【部分圖文】：

虎皮魚梯度低溫脅迫與取樣流程

Swiss-Model同源建模發(fā)現(xiàn),PtSCD1蛋白與4ymk.1.A(PDB,2019-08-02)序列同源性高達63.34%,屬于單體蛋白,序列相似性為0.5,比對范圍氨基酸序列第6～326位,覆蓋度95%,序列比對表明,其蛋白功能為�；o酶A去飽和酶1。根據(jù)其三維結(jié)構(gòu)(圖4),預(yù)測PtSCD1蛋白有2個高度保守的鋅離子結(jié)合位點,有2個配體結(jié)合位點,分別和硬脂酰輔酶A(ST9)、(Z)-十八碳-9-羥基-(2R)-2,3-二氧氮自由基丙酸(MPG)結(jié)合,但是這2個配體的結(jié)合位點序列保守性很差。圖3 蛋白質(zhì)保守結(jié)構(gòu)域預(yù)測結(jié)果

蛋白質(zhì)保守結(jié)構(gòu)域預(yù)測結(jié)果

【參考文獻】：
期刊論文
[1]虎皮魚熱激蛋白PtHsp70基因序列與低溫表達分析[J]. 劉麗麗,王曉雯,朱建亞,張蓉,朱華,田照輝.  水產(chǎn)科學. 2019(06)
[2]魚類低溫耐受機制與功能基因研究進展[J]. 劉麗麗,朱華,閆艷春,王曉雯,張蓉,朱建亞.  生物技術(shù)通報. 2018(08)
[3]硬脂酰輔酶A去飽和酶基因結(jié)構(gòu)功能、調(diào)控因子及在魚類上的研究進展[J]. 馬昕羽,強俊,徐跑,何杰.  江蘇農(nóng)業(yè)科學. 2015(12)
[4]建鯉兩種Δ6脂肪酸去飽和酶基因克隆與表達[J]. 任洪濤,俞菊華,徐跑,唐永凱,李紅霞,李建林.  中國生物化學與分子生物學報. 2012(07)

碩士論文
[1]吉富羅非魚硬脂酰輔酶A去飽和酶（SCD）基因的克隆及溫度與飼料脂肪源對其表達的研究[D]. 馬昕羽.南京農(nóng)業(yè)大學 2016
[2]大黃魚硬脂酰輔酶A去飽和酶-1（SCD1）基因的克隆與鑒定及在低溫條件下對膜流動性影響[D]. 劉浩.浙江海洋學院 2015



本文編號：3549204