結直腸癌已成為國內外最常見的惡性腫瘤之一,多種復雜的分子機制參與直腸癌的發(fā)生發(fā)展,導致其缺少有效的靶向藥物和新的生物標志物,近年來細胞遷移誘導的透明質酸結合蛋白(CEMIP)在多種惡性腫瘤細胞中均被證實異常高表達且參與細胞的生長和轉移,CEMIP在結直腸癌中雖有多項研究報道,但其作用機制仍未有明確的定論,因此本課題假設CEMIP通過多條信號通路調控結直腸癌細胞的生物學行為,為證明該假設我們擬通過構建CEMIP下調的穩(wěn)定轉染細胞系,分別從分子水平和蛋白水平初步揭示CEMIP介導EMT信號通路和內質網應激相關通路調控結腸癌細胞的生物學行為,進一步通過構建荷瘤小鼠模型驗證以上結論,再次明確CEMIP的作用機制和調控通路。我們的研究能夠為深入了解結直腸癌的疾病進展機制和發(fā)現(xiàn)新的生物標志物提供理論依據(jù)。

【文章來源】： 吉林大學吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：104 頁

【文章目錄】：
內容提要
中文摘要
abstract
第1章 緒論
    1.1 前言
    1.2 綜述
        1.2.1 結直腸癌的研究進展
        1.2.2 CEMIP分子結構和功能
        1.2.3 CEMIP信號轉導與調控
        1.2.4 CEMIP與腫瘤
        1.2.5 總結
第2章 CEMIP在結直腸癌Wnt/β-catenin/Snail信號通路及上皮間充質化轉化(EMT)中的作用
    2.1 材料與方法
        2.1.1 細胞系和細胞培養(yǎng)
        2.1.2 常規(guī)試劑和耗材
        2.1.3 主要儀器
    2.2 實驗步驟
        2.2.1 細胞傳代
        2.2.2 質粒構建和轉染
        2.2.3 MTT增殖試驗
        2.2.4 劃痕試驗
        2.2.5 Transwell侵襲實驗
        2.2.6 熒光定量PCR
        2.2.7 Westernblot
        2.2.8 免疫熒光染色
        2.2.9 統(tǒng)計學分析
    2.3 結果
        2.3.1 在結直腸癌細胞系HCT116和SW480中構建CEMIP降表達的穩(wěn)定細胞株
        2.3.2 沉默CEMIP后結直腸癌HCT116和SW480細胞的增殖能力受到抑制
        2.3.3 CEMIPshRNA減弱了結直腸癌HCT116和SW480細胞的遷移能力
        2.3.4 CEMIPshRNA抑制了結直腸癌HCT116和SW480細胞的體外侵襲能力
        2.3.5 CEMIPshRNA抑制了結直腸癌HCT116和SW480細胞EMT的轉換進程
        2.3.6 沉默CEMIP能夠抑制結直腸癌HCT116和SW480細胞中間質標志物的表達但上調上皮細胞標志物的表達
        2.3.7 CEMIPshRNA能夠抑制結直腸癌HCT116和SW480細胞中的Wnt/β-catenin/Snail信號通路
    2.4 討論
    2.5 小結
第3章 CEMIP對結直腸癌細胞增殖和凋亡的影響及在內質網應激中的作用機制研究
    3.1 材料與方法
        3.1.1 細胞系和細胞培養(yǎng)
        3.1.2 常規(guī)試劑和耗材
        3.1.3 主要儀器
    3.2 實驗步驟
        3.2.1 細胞傳代培養(yǎng)
        3.2.2 MTT檢測
        3.2.3 克隆形成試驗
        3.2.4 細胞周期
        3.2.5 Westernblot
        3.2.6 構建動物模型
        3.2.7 HE染色
        3.2.8 TUNEL細胞凋亡檢測
        3.2.9 免疫組織化學染色
        3.2.10 細胞凋亡試驗
        3.2.11 qRT-PCR
    3.3 結果
        3.3.1 CEMIPshRNA-1和shRNA-2抑制結直腸癌細胞中內源性CEMIP的表達
        3.3.2 沉默CEMIP后結腸癌細胞的增殖能力受損
        3.3.3 CEMIPshRNA抑制結腸癌細胞的克隆形成
        3.3.4 CEMIPshRNA誘導結腸癌細胞周期阻滯在G1期
        3.3.5 下調CEMIP能夠抑制移植瘤小鼠的腫瘤生長
        3.3.6 下調CEMIP能夠誘導移植瘤小鼠腫瘤細胞的凋亡
        3.3.7 沉默CEMIP后的移植瘤小鼠腫瘤細胞中CEMIP表達降低.
        3.3.8 沉默CEMIP降低了移植瘤小鼠腫瘤細胞中GRP78蛋白的表達水平
        3.3.9 CEMIPshRNA誘導了結直腸癌細胞的凋亡表達
        3.3.10 CEMIPshRNA下調了未折疊蛋白反應(unfoldedproteinresponse,UPR)相關蛋白的表達
        3.3.11 CEMIPshRNA促進了TG-誘導的細胞凋亡
        3.3.12 CEMIPshRNA增加了TG-誘導的細胞凋亡蛋白的表達
    3.4 討論
    3.5 小結
第4章 結論
參考文獻
作者簡介及已在學期間取得的科研成果
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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