發(fā)布時間：2021-12-11 07:46

　　目的:細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂時需要微管聚合和解聚的正常動態(tài)平衡,從而在有絲分裂的后期染色體能夠隨微管解聚產(chǎn)生的拉力和微管聚合產(chǎn)生的推力,向兩極移動。紫杉醇通過與微管蛋白結(jié)合影響癌細(xì)胞在有絲分裂時的紡錘體形成,從而抑制了癌細(xì)胞分裂和增殖。同時紫杉類藥物在較高濃度下,可以起到一種增敏作用,即對微管的聚合作用有加強(qiáng)作用,這樣導(dǎo)致微管的解聚作用被嚴(yán)重抑制,抑制腫瘤細(xì)胞的增殖,繼而誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞死亡。本課題利用紫杉醇處理肝癌細(xì)胞,觀察紫杉醇對肝癌細(xì)胞干性基因表達(dá)的調(diào)控以及對肝癌細(xì)胞惡性行為的影響,從而探討紫杉醇對肝癌治療的潛在機(jī)制,使紫杉醇能夠靶向治療高表達(dá)某種干性基因或者腫瘤標(biāo)志物的肝癌,提高肝癌的治愈率及肝癌患者的生存質(zhì)量。方法:使用不同濃度的紫杉醇作用于正常肝細(xì)胞L-02、肝癌細(xì)胞HLE和Bel7402 24 h及48 h后,觀察細(xì)胞的生長情況,采用MTT法篩選出紫杉醇的最佳作用濃度及作用時間;通過Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)研究紫杉醇對正常肝細(xì)胞L-02及肝癌細(xì)胞HLE、Bel7402遷移能力的影響;利用蛋白質(zhì)免疫印跡實(shí)驗(yàn)觀察紫杉醇對L-02、HLE、Bel7402細(xì)胞中干性基因AFP、Sox... 

【文章來源】：海南醫(yī)學(xué)院海南省

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

細(xì)胞計(jì)數(shù)圖

圖 3.1 不同濃度的紫杉醇處理 L-02、HLE、Bel7402 24h 及 48h 對細(xì)胞生長的作用A.不同濃度紫杉醇分別作用于 L-02、HLE、Bel7402 細(xì)胞 24 h 后在波長 490 nm 處測得吸光值，B.不同濃度紫杉醇分別作用于 L-02、HLE、Bel7402 細(xì)胞 48 h 后在波長 490 nm 處測得吸光值，橫坐標(biāo)為紫杉醇的不同濃度，縱坐標(biāo)為細(xì)胞增殖率，細(xì)胞增殖率（%）=加藥細(xì)胞組吸光值/正常組吸光值×100%，結(jié)果為三次獨(dú)立重復(fù)實(shí)驗(yàn)，***代表 P＜0.001，相比對照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.2 紫杉醇抑制肝癌細(xì)胞干性基因的表達(dá)通過 Western blot 技術(shù)對不同細(xì)胞中 AFP、Sox2、c-Myc、Klf4、EpCAM、Oct4 等基因的表達(dá)情況進(jìn)行檢測，如圖 3.2-A，與未用紫杉醇作用的細(xì)胞相比較，20 μg/mL 紫杉醇作用 24 h 的 L-02、HLE、Bel7402 細(xì)胞中，AFP、Sox2、c-Myc、

圖 3.2 Western blot 檢測 L-02、HLE、Bel7402 細(xì)胞中干性基因表達(dá)的情況A. Western blot 檢測未用紫杉醇處理的 L-02、HLE、Bel7402 細(xì)胞和用 20 μg/mL 紫杉醇作用 24 h 的 L-02、HLE、Bel7402 細(xì)胞的 AFP、Sox2、c-Myc、Klf4、EpCAM、Oct4 等蛋白的表達(dá)情況的檢測。B. 柱狀圖為 L-02 細(xì)胞干性基因蛋白表達(dá)量與內(nèi)參 GAPDH 灰度掃描值的比值結(jié)果。C.柱狀圖為 HLE 細(xì)胞干性基因蛋白表達(dá)量與內(nèi)參 GAPDH 灰度掃描值的比值結(jié)果。 D. 柱狀圖為 Bel7402 細(xì)胞干性基因蛋白表達(dá)量與內(nèi)參 GAPDH 灰度掃描值的比值結(jié)果，結(jié)果為三次獨(dú)立重復(fù)實(shí)驗(yàn)，**代表 P＜0.01，***代表 P＜0.001，相比對照組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.3 紫杉醇抑制肝癌細(xì)胞惡性行為3.3.1 紫杉醇抑制肝癌細(xì)胞的遷移對 L-02、HLE、Bel7402 三種細(xì)胞利用 Transwell 小室進(jìn)行遷移實(shí)驗(yàn)檢測，

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3534283