背景:乳腺癌是導(dǎo)致女性死亡的主要惡性腫瘤,原因在于缺乏專一而有效的治療靶點,因而尋找特異的治療靶點是乳腺癌研究中的一大難題。lncRNAs是一組不編碼蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)錄體,長度大于200個核苷酸,lncRNA在細胞周期和分化調(diào)控等眾多生命活動中發(fā)揮重要作用,如調(diào)控細胞結(jié)構(gòu)的完整性,控制的亞細胞定位,和表觀遺傳修飾等。長鏈非編碼RNA功能的發(fā)揮通常依賴于互作蛋白,如lncRNA TERRA就是通過與hnRNPA1互作,實現(xiàn)細胞的永生化。lncRNA MEG3（Maternally Expressed Gene3）是一種母系遺傳的印記基因,位于人類染色體14q32,在人體多種正常組織中表達,在腦和垂體高表達,而在非小細胞肺癌和乳腺癌等腫瘤細胞中不表達或低表達,在癌細胞系如HeLa,H4和CH157-MN中重新表達MEG3,均可抑制細胞增殖。此外MEG3能夠促進腫瘤抑制基因p53蛋白表達水平,增強p53與其靶基因啟動子的結(jié)合。MEG3可通過刺激p53依賴的轉(zhuǎn)錄在體外和體內(nèi)誘導(dǎo)細胞凋亡。近年來在肺癌細胞中有研究者運用ChIRP技術(shù)檢測到MEG3可以招募PRC2復(fù)合體的組件JARID2及其靶基因,形成... 

【文章來源】：大連醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

MEG3的亞細胞定位（FISH:紅色熒光探針標記MEG3RNA；DAPI：藍色熒光染料標記細胞核輪廓；Merge：將前兩張熒光圖合并到一起，定位RNA的位置）

純化體系示意圖（ Flp-in system:DOX 誘導(dǎo)基因過表達系統(tǒng)，實現(xiàn) MEG3 在 定過表達；DOX：強力霉素；NE：細胞核提取物；CE：細胞質(zhì)提取物；M蛋白；MBP：麥芽糖結(jié)合蛋白；Amylose beads：直鏈淀粉磁珠；RNP：RN

圖 3 Lenti-X Tet-On 3G 誘導(dǎo)表達系統(tǒng)作用流程圖（Plvx-TRE3G：插入目的基因的質(zhì)粒；Plvx-TRE3G：攜帶調(diào)控子，調(diào)控基因的誘導(dǎo)過表達；VSVG：病毒包裝體系；puro：嘌呤霉素；G418：遺傳霉素）


本文編號：3531130