目的:研究BEL-7404肝癌細(xì)胞ECEL1基因敲減對(duì)CDH1、EGR1、FOSL1、MAP3K1基因表達(dá)的影響,探討敲減ECEL1基因后抑制肝癌細(xì)胞的增殖、促進(jìn)其凋亡的機(jī)制,為肝癌防治提供新的靶點(diǎn)。方法:實(shí)驗(yàn)分為實(shí)驗(yàn)組（shECEL1組）和對(duì)照組（sh Ctrl組）,應(yīng)用ECEL1基因的慢病毒載體體外感染人肝癌細(xì)胞BEL-7404,通過熒光顯微鏡檢測(cè)感染效率;然后提取兩組細(xì)胞總RNA,通過qPCR檢測(cè)敲減ECEL1前后BEL-7404細(xì)胞ECEL1 mRNA的表達(dá)情況;最后通過qPCR分別檢測(cè)ECEL1基因敲減后人肝癌細(xì)胞BEL-7404 CDH1、EGR1、FOSL1、MAP3K1基因表達(dá)情況。結(jié)果:（1）兩組人肝癌細(xì)胞BEL-7404慢病毒感染情況:shECEL1組和shCtrl組細(xì)胞均可見綠色熒光,計(jì)算兩組感染效率在80%以上,慢病毒載體感染成功。（2）感染后兩組人肝癌細(xì)胞BEL-7404 ECEL1 m RNA表達(dá)情況:shECEL1組與shCtrl組相比,ECEL1 mRNA的表達(dá)受到抑制,表達(dá)水平顯著降低（P<0.01）敲減效率達(dá)到70.5%。成功構(gòu)建穩(wěn)定的ECEL... 

【文章來源】：湖南師范大學(xué)湖南省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：56 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖3-1兩組慢病毒感染熒光檢測(cè)結(jié)果

碩士學(xué)位論文1470.5%；擴(kuò)增產(chǎn)物熔解曲線顯示主峰沒有異常加寬和雜峰，說明整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中未出現(xiàn)非特異性引物二聚體及擴(kuò)增污染（表3-1，圖3-2，圖3-3）。這說明穩(wěn)定的ECEL1基因敲減的人肝癌細(xì)胞得以成功構(gòu)建。表3-1ECEL1基因敲減后mRNA表達(dá)水平（xs）及敲減率實(shí)驗(yàn)分組2-Ct敲減率tPshECEL10.295±0.0170.705shCtrl1.001±0.052/22.465<0.010.0000.2000.4000.6000.8001.0001.200shCtrlshECEL1實(shí)驗(yàn)分組relativemRNAlevel(ECEL1/GAPDH)圖3-2ECEL1基因敲減后細(xì)胞中ECEL1mRNA表達(dá)水平，P<0.01圖3-3ECEL1擴(kuò)增產(chǎn)物熔解曲線

碩士學(xué)位論文16圖3-5CDH1擴(kuò)增產(chǎn)物熔解曲線3.4.2ECEL1基因敲減后EGR1表達(dá)情況：通過qPCR檢測(cè)EGR1表達(dá)水平，采用2-Ct法分析數(shù)據(jù)，人肝癌細(xì)胞BEL-7404中shECEL1組中EGR1表達(dá)豐度是對(duì)照組的0.111倍（P<0.01），擴(kuò)增產(chǎn)物熔解曲線顯示主峰沒有異常加寬和雜峰，說明整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中未出現(xiàn)非特異性引物二聚體及擴(kuò)增污染（表3-3，圖3-6，圖3-7）。表明敲減ECEL1基因可減弱人肝癌細(xì)胞BEL-7404中EGR1基因的表達(dá)。表3-3ECEL1基因敲減后EGR1表達(dá)水平（xs）及敲減率實(shí)驗(yàn)分組2-Ct敲減率tPshECEL10.111±0.0040.889shCtrl1.002±0.072/21.354<0.010.00.20.40.60.81.01.2shCtrl實(shí)驗(yàn)分組shECEL1relativemRNAlevel(EGR1/GAPDH)圖3-6ECEL1基因敲減后EGR1的表達(dá)水平，＜0.01

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號(hào)：3495401