紫色類鶉斑q-l^p和褐色類鶉斑q-l^b均是從素蠶品種發(fā)現(xiàn)的色素沉積突變體,表型與鶉斑q相似,但與q并不是同一個(gè)基因控制的。遺傳分析表明控制兩種突變體突變性狀的基因是等位基因,且q-l^b相對(duì)于q-l^p為顯性。圖位克隆將兩種類鶉斑突變體的突變基因定位到了家蠶第8連鎖群,且q-l^p的突變基因是orcokinin（OK）基因,一個(gè)單堿基的缺失引起orcokinin的兩個(gè)轉(zhuǎn)錄本翻譯提前終止,致使orcokinin功能完全喪失。orcokinin基因是節(jié)肢動(dòng)物門所特有的一種神經(jīng)肽基因,最早在利莫斯螯蝦（Orconectes limosus）中發(fā)現(xiàn),因其具有向肌性而命名為orcokinin,2004年首次在昆蟲(chóng)中發(fā)現(xiàn),目前發(fā)現(xiàn)orcokinin可能有控制生物節(jié)律、調(diào)控蛻皮激素信號(hào)通路等功能,然而其作用機(jī)理尚不清楚,甚至目前沒(méi)有鑒定到一個(gè)orcokinin的受體。在此基礎(chǔ)上,本研究首先明確q-l^b的突變基因也是orcokinin,然后分析家蠶orcokinin（BmOK）... 

【文章來(lái)源】：江蘇科技大學(xué)江蘇省

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮寫詞匯對(duì)照表
第1章 緒論
    1.1 選題背景和選題意義
    1.2 國(guó)內(nèi)外研究進(jìn)展
        1.2.1 神經(jīng)肽的研究概況
        1.2.2 昆蟲(chóng)神經(jīng)肽的研究進(jìn)展
        1.2.3 向肌肽orcokinin研究進(jìn)展
        1.2.4 昆蟲(chóng)神經(jīng)肽受體研究進(jìn)展
        1.2.5 研究展望
    1.3 主要研究?jī)?nèi)容
        1.3.1 q-l~b突變基因的篩選
        1.3.2 家蠶orcokinin(BmOK)基因的選擇性剪接與表達(dá)分析
        1.3.3 BmOK基因功能分析
        1.3.4 兩種類鶉斑突變體表皮組織相關(guān)基因表達(dá)分析
        1.3.5 醛糖還原酶基因功能分析
    1.4 技術(shù)路線圖
第2章 Orcokinin是引起褐色類鶉斑q-l~b突變性狀的主效基因
    2.1 前言
    2.2 材料與方法
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.2.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        2.2.4 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.5 實(shí)驗(yàn)引物
    2.3 結(jié)果與分析
        2.3.1 Orcokinin基因表達(dá)分析
        2.3.2 Orcokinin基因ORF在q-l~b中出現(xiàn)結(jié)構(gòu)變異
        2.3.3 Orcokinin基因變異位點(diǎn)在基因組上的克隆
    2.4 討論
    2.5 結(jié)論
第3章 家蠶orcokinin(BmOK)基因選擇性剪接與表達(dá)分析
    3.1 前言
    3.2 材料與方法
        3.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.2.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        3.2.4 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.5 引物列表
    3.3 結(jié)果與分析
        3.3.1 BmOK基因存在選擇性剪接
        3.3.2 BmOK基因全長(zhǎng)mRNA克隆
        3.3.3 BmOK基因表達(dá)譜分析
        3.3.4 BmOKA基因在不同斑紋家蠶中的表達(dá)情況
        3.3.5 BmOKA同源性分析
    3.4 討論
    3.5 結(jié)論
第4章 BmOK基因功能分析
    4.1 前言
    4.2 材料與方法
        4.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        4.2.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        4.2.4 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.5 引物列表
    4.3 結(jié)果與分析
        4.3.1 RNAi
        4.3.2 成熟肽注射回復(fù)突變
        4.3.3 CRISPR/cas9系統(tǒng)構(gòu)建
        4.3.4 類鶉斑突變體調(diào)控機(jī)制分析
    4.4 討論
    4.5 結(jié)論
第5章 家蠶類鶉斑突變體四齡眠期表皮組織相關(guān)基因表達(dá)分析
    5.1 前言
    5.2 材料與方法
        5.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        5.2.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        5.2.4 實(shí)驗(yàn)方法
        5.2.5 實(shí)驗(yàn)引物
    5.3 結(jié)果與討論
        5.3.1 q-l~p突變體轉(zhuǎn)錄組測(cè)序數(shù)據(jù)基本情況
        5.3.2 qRT-PCR驗(yàn)證測(cè)序數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性
        5.3.3 q-l~p突變體中轉(zhuǎn)錄組差異倍數(shù)較大的基因
        5.3.4 兩種類鶉斑突變體中色素合成相關(guān)差異基因
        5.3.5 q-l~p突變體中表皮蛋白基因差異表達(dá)分析
        5.3.6 兩種類鶉斑突變體中幾丁質(zhì)合成相關(guān)基因
        5.3.7 兩種類鶉斑突變體中尿酸運(yùn)輸差異表達(dá)基因
        5.3.8 兩種類鶉斑突變體中核受體差異表達(dá)基因
        5.3.9 apt-like基因在兩種類鶉斑突變體中的表達(dá)情況
    5.4 結(jié)論
第6章 醛糖還原酶的下調(diào)表達(dá)影響了家蠶生長(zhǎng)發(fā)育
    6.1 前言
    6.2 材料與方法
        6.2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        6.2.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        6.2.3 實(shí)驗(yàn)試劑
        6.2.4 實(shí)驗(yàn)方法
        6.2.5 實(shí)驗(yàn)引物
    6.3 結(jié)果與分析
        6.3.1 .BmAR基因在q-l~p中表達(dá)量降低
        6.3.2 .組織表達(dá)譜分析
        6.3.3 RNAi降低BmAR基因的表達(dá)
        6.3.4 家蠶血液山梨醇含量測(cè)定
        6.3.5 BmAR基因氨基酸序列分析
    6.4 討論
    6.5 結(jié)論
結(jié)論
創(chuàng)新點(diǎn)
展望
參考文獻(xiàn)
攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]水稻螟蟲(chóng)神經(jīng)肽PBAN及其受體序列的生物信息學(xué)分析[J]. 常菊花,何月平.  應(yīng)用昆蟲(chóng)學(xué)報(bào). 2016(03)
[3]昆蟲(chóng)神經(jīng)肽F的研究進(jìn)展[J]. 黃一村,時(shí)敏,陳學(xué)新.  應(yīng)用昆蟲(chóng)學(xué)報(bào). 2015(06)
[4]家蠶兩種新的類鶉斑突變體的遺傳分析和SSR標(biāo)記定位[J]. 趙巧玲,王文波,陳安利,裘智勇,夏定國(guó),錢荷英,沈興家.  遺傳. 2014(04)
[5]家蠶模式化研究進(jìn)展[J]. 秦儉,何寧佳,向仲懷.  蠶業(yè)科學(xué). 2010(04)
[6]醛糖還原酶的研究進(jìn)展[J]. 谷娟,嚴(yán)謹(jǐn),吳衛(wèi)華,黃琪,歐陽(yáng)冬生.  中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2010(04)
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[9]貝類神經(jīng)肽研究進(jìn)展[J]. 李華.  生命科學(xué)儀器. 2007(01)
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博士論文
[1]家蠶“明”死卵突變體l-em基因的定位克隆及功能研究[D]. 陳安利.江蘇科技大學(xué) 2013

碩士論文
[1]粘蟲(chóng)脂動(dòng)激素基因的克隆與成蟲(chóng)期表達(dá)模式分析[D]. 解幸承.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2016
[2]家蠶新突變體紫色類鶉斑q-lp的定位分析[D]. 王平陽(yáng).江蘇科技大學(xué) 2015
[3]家蠶抑前胸腺肽受體的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制研究[D]. 臧家恕.浙江大學(xué) 2015
[4]家蠶新突變體褐色類鶉斑q-ιb的遺傳分析及基因定位[D]. 王文波.江蘇科技大學(xué) 2014
[5]家蠶促咽側(cè)體素受體鑒定及相關(guān)神經(jīng)肽受體基因的發(fā)育表達(dá)[D]. 邱娜莎.合肥工業(yè)大學(xué) 2012
[6]家蠶PTTH基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控及相關(guān)神經(jīng)肽的發(fā)育表達(dá)[D]. 于淼.合肥工業(yè)大學(xué) 2010



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