以野生圓葉牽牛（Pharbitis purpurea（L.）Voisgt）PpDFR基因ORF區(qū)內(nèi)539bp-939bp區(qū)段作為最佳RNA干擾（RNA interference,RNAi）靶序列,克隆該區(qū)段并將其插入p BWA（V）KS載體,構(gòu)建DFR基因的干擾載體,命名為pBWA（V）KS-Pp DFR。本研究為鑒定二氫黃酮4-還原酶（dihydroflavonol4-reductase,DFR）基因在色素合成過程中的功能及定向創(chuàng)造植物新種質(zhì)奠定基礎。 

【文章來源】：現(xiàn)代園藝. 2020,43(21)

【文章頁數(shù)】：2 頁

【部分圖文】：

目的基因PCR擴增

3.2 DFR的RNAi載體構(gòu)建構(gòu)建的DFR基因的RNAi載體質(zhì)粒37℃酶切2h后電泳圖條帶清晰，和目的基因片段及載體序列大小大致吻合，初步確定目的基因片段已連接帶質(zhì)粒載體上。經(jīng)測序后，所測得的序列與目的基因片段序列吻合，由此說明成功構(gòu)建了DFR基因的RNAi載體，P-r DNAtlt3-p BWA (V)KS-cc DB。DFR基因RNAi表達載體的結(jié)構(gòu)如圖3。

不同的植物DFR基因的表達不同，同一植物不同組織和不同發(fā)育期，其表達量也不同，這說明DFR基因的表達存在特異性。菊花的DFR基因的表達量隨著開花時間的延長逐漸降低[9]；常春藤的DFR基因發(fā)在其幼苗生長期的活性較高而成熟期不表達[10]；烏頭的DFR基因在各器官表達量存在顯著差異，在其花中活性最高，而在莖、葉和根中基因的表達量卻非常少[11]。植物的DFR基因還受環(huán)境因子的變化而影響其活性。環(huán)境的變化主要是指光照、溫度、電解離子濃度及p H值等的變化。有研究表明玫瑰晝夜溫差為21℃培養(yǎng)3d,DFR的表達量下降[12]。當Ca2+濃度變大，DFR基因表達量升高[13]。本研究構(gòu)建了圓葉牽牛DFR基因的RNAi載體，為進一步鑒定Pp DFR基因在花色素甘合成過程中的功能，揭示其與植物花色呈現(xiàn)的關(guān)系，培育花卉新品種奠定基礎。


本文編號：3492325