HY5為調(diào)控光形態(tài)建成的轉(zhuǎn)錄因子,調(diào)控花青素的生物合成與累積。通過構(gòu)建云紅梨1號(hào)HY5基因的原核表達(dá)載體,旨在為研究HY5蛋白的生物功能奠定基礎(chǔ)。將云紅梨1號(hào)的HY5基因構(gòu)建到原核表達(dá)載體pGEX-4T-1上,并對(duì)其進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),通過谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶（GST）親和層析色譜柱純化融合蛋白。結(jié)果表明,重組質(zhì)粒pGEX-4T-1-PyHY5的酶切檢測(cè)及測(cè)序結(jié)果均正確,表明重組質(zhì)粒載體構(gòu)建成功。十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）結(jié)果顯示,用100 mmol/L異丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）在37℃、220 r/min條件下誘導(dǎo)3 h后收集誘導(dǎo)菌株,在BL21菌株中均有明顯的目的條帶,誘導(dǎo)表達(dá)后的融合蛋白大小約為43.90 ku;PyHY5蛋白能夠與pGEX-4T-1載體上的GST標(biāo)簽蛋白進(jìn)行融合表達(dá)。通過研究成功構(gòu)建了pGEX-4T-1-PyHY5原核表達(dá)載體,誘導(dǎo)表達(dá)并純化出PyHY5融合蛋白為進(jìn)一步研究其生物學(xué)功能奠定了基礎(chǔ)。 

【文章來(lái)源】：江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué). 2020,48(20)

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 試驗(yàn)材料
        1.1.1 試驗(yàn)材料
        1.1.2 主要試劑
        1.1.3 主要儀器與設(shè)備
    1.2 試驗(yàn)方法
        1.2.1 云紅梨1號(hào)HY5基因的克隆
        1.2.2 PyHY5基因和pGEX-4T-1載體的雙酶切
        1.2.3 pGEX-4T-1-PyHY5原核表達(dá)載體的構(gòu)建
        1.2.4 pGEX-4T-1-PyHY5原核表達(dá)載體的誘導(dǎo)表達(dá)
            1.2.4.1 蛋白的小量表達(dá)
            1.2.4.2 蛋白的大量表達(dá)
            1.2.4.3 蛋白可溶性的鑒定
        1.2.5 pGEX-4T-1-PyHY5原核表達(dá)蛋白的純化
2 結(jié)果與分析
    2.1 pGEX-4T-1-PyHY5原核表達(dá)載體的構(gòu)建
    2.2 pGEX-4T-1-PyHY5原核表達(dá)載體的表達(dá)
    2.3 pGEX-4T-1-PyHY5原核表達(dá)蛋白的可溶性鑒定
    2.4 pGEX-4T-1-PyHY5原核表達(dá)蛋白的純化
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]光調(diào)控因子HY5及HYH在蔗糖誘導(dǎo)花青素積累中作用[J]. 王立光,李靜雯,葉春雷,陳軍,羅俊杰.  甘肅農(nóng)業(yè)科技. 2019(01)
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博士論文
[1]可用作生物殺蟲劑的家蠶核型多角體病毒orf65、orf91的基因功能分析[D]. 唐琦.江蘇大學(xué) 2013

碩士論文
[1]中國(guó)鮮梨國(guó)際競(jìng)爭(zhēng)力研究[D]. 杜葳.東北農(nóng)業(yè)大學(xué) 2016



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