本研究以A549/DDP細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,利用shRNA（short hairpin RNA）沉默MDR1基因,逆轉(zhuǎn)人肺癌A549/DDP細(xì)胞對(duì)順鉑的耐藥性。構(gòu)建3種靶向MDR1基因重組干擾載體,穩(wěn)定轉(zhuǎn)染A549/DDP細(xì)胞,qRT-PCR檢測(cè)MDR1 mRNA表達(dá)水平,Western blotting檢測(cè)MDR1蛋白表達(dá)水平,MTT法檢測(cè)細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性。結(jié)果顯示成功構(gòu)建了3種靶向MDR1的重組表達(dá)載體p2.1-1、p2.1-2和p2.1-3。3種干擾表達(dá)載體均能有效沉默A549/DDP細(xì)胞MDR1基因表達(dá),其中p2.1-3對(duì)MDR1沉默效果最好,對(duì)mRNA和蛋白的沉默效率分別為51.47%和53.24%。轉(zhuǎn)染p2.1-3的細(xì)胞對(duì)順鉑的IC50由（72.08±7.00）μmol/L降至（31.89±3.39）μmol/L,逆轉(zhuǎn)率達(dá)到（67.60±5.70）%。這些結(jié)果表明靶向MDR1的重組干擾載體均能夠有效抑制MDR1表達(dá),其中p2.1-3干擾效果最佳并且能逆轉(zhuǎn)A549/DDP細(xì)胞對(duì)順鉑的耐藥性。 

【文章來源】：基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué). 2016,35(12)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
1 結(jié)果與分析
    1.1 靶向MDR1重組干擾載體的構(gòu)建
    1.2 重組干擾載體對(duì)MDR1 m RNA表達(dá)的影響
    1.3 重組干擾載體對(duì)MDR1蛋白質(zhì)表達(dá)的影響
    1.4 A549/DDP轉(zhuǎn)染細(xì)胞對(duì)順鉑耐藥性
2 討論
3 材料與方法
    3.1 材料來源
    3.2 靶向MDR1的重組干擾載體的構(gòu)建
    3.3 重組干擾載體轉(zhuǎn)染A549/DDP細(xì)胞
    3.4 q RT-PCR檢測(cè)MDR1/m RNA的表達(dá)水平
    3.5 Western blotting檢測(cè)MDR1蛋白水平
    3.6 MTT法檢測(cè)細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性變化
    3.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
作者貢獻(xiàn)


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]與P-糖蛋白及MDR1基因關(guān)聯(lián)的藥物轉(zhuǎn)運(yùn)研究現(xiàn)狀[J]. 馮慧玲,熊玉卿.  中國(guó)臨床藥理學(xué)雜志. 2014(11)
[2]肺癌的流行病學(xué)及治療現(xiàn)狀[J]. 姚曉軍,劉倫旭.  現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué). 2014(08)
[3]MDR1調(diào)控的信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 王秀梅,彭文興,文曉柯.  中國(guó)醫(yī)藥指南. 2012(30)
[4]肺癌的免疫治療臨床研究進(jìn)展[J]. 金莎,田建輝.  中國(guó)肺癌雜志. 2012(10)
[5]耐順鉑相關(guān)基因MDR1、MRP、LRP及GST-π在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及與生存相關(guān)的Meta分析[J]. 趙明靜,馬列,王群,韓冰,王笑歌.  現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué). 2012(08)
[6]RNAi抑制腎癌細(xì)胞MDR1基因表達(dá)及對(duì)順鉑化療耐藥的逆轉(zhuǎn)[J]. 郝怡鑫,賀錚雯,杜楠,魯瓊,肖文華,沈茜.  腫瘤. 2010(02)
[7]靶向MDR1基因的RNAi穩(wěn)定逆轉(zhuǎn)結(jié)腸癌細(xì)胞的多藥耐藥性[J]. 夏忠勝,朱兆華,陳其奎,鐘英強(qiáng),張立勇,劉仲敏,ADAM Bao-ling.  中國(guó)病理生理雜志. 2009(05)



本文編號(hào)：3479316