玫瑰（Rosa rugosa）是我國(guó)傳統(tǒng)名花。研究發(fā)現(xiàn),玫瑰自交不親和機(jī)制與杏（Armeniaca vulgaris Lam.）、梨（Pyrus spp）等薔薇科植物的自交不親和機(jī)制相同,都屬于S-RNase參與的配子體自交不親和。植物S基因（包括花柱S-RNase基因和花粉SLF基因）控制了自交不親和現(xiàn)象,對(duì)花粉SLF基因的研究是探索配子體自交不親和（GSI）機(jī)制的關(guān)鍵之一。本文運(yùn)用RT-PCR結(jié)合RACE技術(shù)從玫瑰花粉中克隆得到一條玫瑰自交不親和基因RrSLF,分析了該基因的序列特征和生物信息學(xué)特性,并對(duì)其進(jìn)行了亞細(xì)胞定位研究和熒光定量表達(dá)分析,為進(jìn)一步深入研究玫瑰自交不親和機(jī)理奠定了基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下:1.玫瑰RrSLF基因序列全長(zhǎng)1236 bp,開(kāi)放閱讀框1122bp,共編碼373個(gè)氨基酸。玫瑰RrSLF基因編碼蛋白:相對(duì)分子量為43706.15Da;理論等電點(diǎn)值PI=6.24;在343-741位含有F-box保守結(jié)構(gòu)域;沒(méi)有信號(hào)肽切割位點(diǎn),為非分泌蛋白;平均疏水性指數(shù)為0.716,為疏水性蛋白;無(wú)跨膜區(qū)存在;有21個(gè)Ser磷酸化位點(diǎn),7個(gè)Thr酸磷化位點(diǎn),7個(gè)Tyr氨酸磷... 

【文章來(lái)源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：59 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

pROKII-GFP結(jié)構(gòu)

圖 3-1 玫瑰花柱總 RNA 電泳圖M:DL2000maker;1,2:RNA 條帶Fig. 3-1 Total RNA isolated from Rosa rugosa styleM: DL2000maker;1,2:RNA bands間片段、3′-RACE 和 5′-RACE 克隆并引物 F1、R1，擴(kuò)增得到大約 401接至 pMD18-T 載體，轉(zhuǎn)化大腸桿菌CR 驗(yàn)證合格后送北京華大公司測(cè)序，列與杏、野草莓和扁桃的 SLF 基因計(jì)引物分別進(jìn)行 3′-RACE 和 5′-RRACE 序列片段，3′-RACE 序列長(zhǎng)度RACE 和 5′-RACE PCR 產(chǎn)物分別切態(tài)細(xì)胞，挑取陽(yáng)性克隆，培養(yǎng)過(guò)夜，測(cè)序序列分別在 NCBI 網(wǎng)站上比對(duì)，結(jié)

M:DL2000maker;1,2:RNA 條帶Fig. 3-1 Total RNA isolated from Rosa rugosa styleM: DL2000maker;1,2:RNA bands.2 玫瑰 RrSLF 基因中間片段、3′-RACE 和 5′-RACE 克隆根據(jù)保守序列設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物 F1、R1，擴(kuò)增得到大約 401bp 大小的中間片段。PCR 產(chǎn)物切膠回收后鏈接至 pMD18-T 載體，轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞，挑取陽(yáng)培養(yǎng)過(guò)夜，經(jīng)菌液 PCR 驗(yàn)證合格后送北京華大公司測(cè)序，將測(cè)序序列在 NCBI 對(duì)，結(jié)果顯示所得序列與杏、野草莓和扁桃的 SLF 基因序列一致性達(dá) 66%-73中間片段序列及所設(shè)計(jì)引物分別進(jìn)行 3′-RACE 和 5′-RACE 擴(kuò)增，獲得該基 3′-RACE 和 5′-RACE 序列片段，3′-RACE 序列長(zhǎng)度為 751bp，5′-RAC度為 267bp，將 3′-RACE 和 5′-RACE PCR 產(chǎn)物分別切膠回收后連接至 pMD，轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞，挑取陽(yáng)性克隆，培養(yǎng)過(guò)夜，經(jīng)菌液 PCR 驗(yàn)證合京華大公司測(cè)序，將測(cè)序序列分別在 NCBI 網(wǎng)站上比對(duì)，結(jié)果顯示 3′-RACE 和CE 序列與扁桃、杏和日本櫻的 SLF 基因序列一致性達(dá) 61%-71%（圖 3-2）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]梨自交親和性變異的分子機(jī)理研究[D]. 吳華清.南京農(nóng)業(yè)大學(xué) 2006



本文編號(hào)：3456275