本文關(guān)鍵詞：三色堇耐熱資源初步篩選與熱激蛋白70基因表達分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：在前期對三色堇資源田間調(diào)查的基礎(chǔ)上,于2014年4-7月對26份三色堇資源進行耐熱性田間鑒定,并對不同耐熱性三色堇資源在高溫脅迫下的生理生化特性進行研究;開展了不同三色堇資源HSP70基因的克隆,并對HSP70基因在高溫脅迫下的表達進行了研究,主要研究結(jié)果如下:(1)三色堇表型性狀調(diào)查顯示,供試26份三色堇資源在株高、株幅、花徑、葉長、葉寬、分枝數(shù)、花數(shù)、花色等表型性狀上均存在較大差異,具有豐富的表型多樣性;以高溫下三色堇的外觀形態(tài)和生長狀況為主要鑒定標準,共篩選出3份耐熱三色堇資源,分別為HAR、DFM-16、DFM-17。(2)高溫脅迫下,不同三色堇資源光化學(xué)效率均出現(xiàn)不同程度的下降,且耐熱資源較不耐熱資源下降幅度小,細胞膜透性變化小,熱害指數(shù)低,脯氨酸含量升高幅度大,表現(xiàn)出對高溫環(huán)境更強的適應(yīng)性;高溫處理下5份三色堇資源POD、CAT活性均低于常溫對照,SOD活性相對穩(wěn)定。(3)試驗共獲得4份不同三色堇資源的HSP70基因片段,其中E01、DFM-16、DFM-17長1571bp,08H長1572bp,序列相似率為98.33%,與參考基因片段和擬南芥HSP70的相似率分別為93.06%和74.13%,與蓖麻、可可樹等植物HSP70基因序列相似率均在84%以上;4份三色堇資源的HSP70基因片段相似率高且高度保守,系同源基因;依據(jù)HSP70基因保守性特點和堿基序列的相似率,初步確定獲得的4個基因片段為三色堇HSP70片段。(4)常溫處理下,不同耐熱性三色堇資源的HSP70基因表達量無顯著差異,隨處理溫度的升高,HSP70基因表達量升高,42℃條件下,耐熱資源DFM-16的表達量最高,為常溫參照的2.5倍;常溫下,隨處理時間的增加,耐熱資源DFM-16與不耐熱08H的HSP70基因表達量均無顯著變化;42℃處理下,隨處理時間的增加,DFM-16與08H的HSP70基因的表達量均急劇升高,在2 h時分別達到常溫參照的6倍和17倍,其中耐熱資源DFM-16的表達量顯著高于不耐熱資源08H。表明HSP70基因的差異表達是引起不同三色堇資源間耐熱性差異的原因之一。
【關(guān)鍵詞】：三色堇 高溫脅迫 生理生化 HSP70 表達分析
【學(xué)位授予單位】：河南科技學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：S682.19
【目錄】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-10
• 第一章 文獻綜述10-18
• 1.1 高溫脅迫對植物生長發(fā)育的影響10-12
• 1.1.1 高溫脅迫對植物外觀形態(tài)的影響10
• 1.1.2 高溫脅迫對植物生理生化變化的影響10-12
• 1.2 植物熱激蛋白(HSP)研究12-15
• 1.2.1 熱激蛋白(HSP)的分類與分布12
• 1.2.2 熱激蛋白(HSP)的結(jié)構(gòu)與功能12-13
• 1.2.3 熱激蛋白 70(HSP70)的分類13
• 1.2.4 熱激蛋白 70(HSP70)的結(jié)構(gòu)特點13-14
• 1.2.5 熱激蛋白 70(HSP70)的功能14-15
• 1.2.6 熱激蛋白 70(HSP70)基因結(jié)構(gòu)特點及表達調(diào)控15
• 1.3 三色堇耐熱特性研究15-16
• 1.4 研究的目的和意義16-18
• 第二章 三色堇資源耐熱性田間鑒定與耐熱資源篩選18-26
• 2.1 材料18-19
• 2.2 方法19-20
• 2.2.1 三色堇表型調(diào)查19-20
• 2.2.2 三色堇耐熱性鑒定20
• 2.3 結(jié)果與分析20-24
• 2.3.1 三色堇資源表型多樣性分析20-23
• 2.3.2 三色堇資源耐熱性田間鑒定23-24
• 2.4 討論24-25
• 2.5 小結(jié)25-26
• 第三章 三色堇耐熱生理生化特性研究26-42
• 3.1 材料26
• 3.2 方法26-32
• 3.2.1 材料培育26-27
• 3.2.2 材料處理27
• 3.2.3 儀器及試劑27-29
• 3.2.4 熱害指數(shù)及生理生化指標測定29-32
• 3.3 結(jié)果與分析32-39
• 3.3.1 高溫脅迫對三色堇熱害指數(shù)的影響32-33
• 3.3.2 高溫脅迫對三色堇細胞膜透性的影響33-34
• 3.3.3 高溫脅迫對三色堇PSⅡ最大光化學(xué)效率(Fv/Fm)的影響34-35
• 3.3.4 高溫脅迫對三色堇脯氨酸含量的影響35-36
• 3.3.5 高溫脅迫對三色堇抗氧化酶活性的影響36-39
• 3.4 討論39-40
• 3.5 小結(jié)40-42
• 第四章 三色堇熱激蛋白 70（HSP70）基因片段的分離42-52
• 4.1 材料42
• 4.2 方法42-46
• 4.2.1 材料處理42
• 4.2.2 主要試劑42
• 4.2.3 總RNA提取42-43
• 4.2.4 反轉(zhuǎn)錄體系構(gòu)建43
• 4.2.5 三色堇HSP70基因片段引物設(shè)計43-44
• 4.2.6 三色堇HSP70基因片段擴增44-46
• 4.2.7 瓊脂糖凝膠回收體系46
• 4.2.8 三色堇HSP70基因片段拼接及比對46
• 4.3 結(jié)果與分析46-49
• 4.3.1 總RNA質(zhì)量46-47
• 4.3.2 三色堇HSP70基因片段的克隆47-48
• 4.3.3 三色堇HSP70基因片段測序與拼接48
• 4.3.4 三色堇HSP70基因片段與其他植物HSP70基因序列對比48-49
• 4.4 討論49-50
• 4.5 小結(jié)50-52
• 第五章 三色堇熱激蛋白 70（HSP70）基因表達分析52-60
• 5.1 材料52
• 5.2 方法52-54
• 5.2.1 材料處理52
• 5.2.2 主要試劑52
• 5.2.3 總RNA提取及c DNA轉(zhuǎn)化52
• 5.2.4 特異性引物設(shè)計及驗證52-53
• 5.2.5 實時熒光定量表達體系53-54
• 5.3 結(jié)果與分析54-58
• 5.3.1 引物特異性驗證54-55
• 5.3.2 三色堇HSP70基因的表達差異分析55-58
• 5.4 討論58-59
• 5.5 小結(jié)59-60
• 全文結(jié)論60-62
• 參考文獻62-68
• 附錄68-72
• 致謝72-74
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文74

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