發(fā)布時(shí)間：2017-04-13 08:10

  本文關(guān)鍵詞：多花水仙離體快繁技術(shù)研究及WD40基因表達(dá)分析，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：多花水仙為石蒜科(Amaryllidaceae)水仙屬(Narcissus L.)多年生球根類花卉,具有較高的經(jīng)濟(jì)和觀賞價(jià)值。長(zhǎng)期的無(wú)性繁殖,大大限制了其繁殖速度且容易造成病毒積累,致使品種退化,抗性減弱。因此,提高多花水仙的抗性,加快其優(yōu)質(zhì)脫毒種苗的生產(chǎn)和優(yōu)質(zhì)新品種的推廣,對(duì)于多花水仙持續(xù)發(fā)展至關(guān)重要。本研究以‘云香水仙’和白花Ⅱ水仙鱗莖為材料,研究了不同培養(yǎng)基對(duì)兩個(gè)水仙品種離體培養(yǎng)的影響,篩選出適宜的培養(yǎng)基,為水仙脫毒種苗的生產(chǎn)、種質(zhì)資源的保存和新品種的推廣應(yīng)用提供理論支持和技術(shù)指導(dǎo),也為水仙品種改良充實(shí)基礎(chǔ)資料。同時(shí),本研究從福建農(nóng)林大學(xué)園藝學(xué)院遺傳育種研究所獲得的‘云香水仙’轉(zhuǎn)錄組中篩選了與抗性有關(guān)的WD40基因片段,克隆了開(kāi)放閱讀框,并分析了該基因在非生物脅迫下的表達(dá),以期為水仙品種改良提供參考。主要研究結(jié)果如下：1.本試驗(yàn)探索了‘云香水仙’和白花Ⅱ水仙的外植體消毒方法和較適培養(yǎng)基,‘云香水仙’和白花Ⅱ水仙鱗莖盤消毒處理分別以25%的次氯酸鈉溶液浸泡30min和25 mmin為好；‘云香水仙’小鱗莖誘導(dǎo)最佳培養(yǎng)基：MS+1.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L 2,4-D,白花Ⅱ水仙不定芽誘導(dǎo)最佳培養(yǎng)基：MS+0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L2,4-D；‘云香水仙’和白花Ⅱ水仙愈傷組織分化的最佳培養(yǎng)基分別為MS+5.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA和MS+3.0 mg/L 6-BA+O.5 mg/L NAA;‘云香水仙’和白花Ⅱ水仙繼代的最佳培養(yǎng)基：MS+1.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L 2,4-D;‘云香水仙’和白花Ⅱ水仙最佳的生根培養(yǎng)基為1/2MS+0.05 mg/L IBA+0.1 mg/L NAA�！葡闼伞桶谆á蛩呻x體再生體系的建立為轉(zhuǎn)基因育種、原種保存、種質(zhì)資源保存及新品種推廣提供技術(shù)支持。2.通過(guò)RT-PCR技術(shù)獲得了‘云香水仙’WD40基因(GenBank登錄號(hào)：KU193745),并通過(guò)生物信息學(xué)手段及軟件,對(duì)其結(jié)構(gòu)特征進(jìn)行了分析,并進(jìn)行了功能預(yù)測(cè)。WD40基因包含一個(gè)420bp的開(kāi)放閱讀框,編碼140個(gè)氨基酸,屬疏水性蛋白,系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析結(jié)果表明,該基因編碼的蛋白與海棗、小果野蕉、玉米等親緣關(guān)系較近。3.對(duì)‘云香水仙’進(jìn)行高溫、鹽、ABA非生物脅迫處理,熒光定量結(jié)果表明,WD40基因相對(duì)表達(dá)量出現(xiàn)了不同程度的上調(diào),高溫處理下WD40表達(dá)量變化最為顯著,推測(cè)該基因參與了高溫、鹽、激素等非生物脅迫過(guò)程。
【關(guān)鍵詞】：‘云香水仙’ 白花Ⅱ水仙 離體培養(yǎng) WD40
【學(xué)位授予單位】：福建農(nóng)林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S682.21
【目錄】：

• 摘要8-10
• ABSTRACT10-12
• 縮略詞12-13
• 第一章 前言13-23
• 1 水仙離體快繁技術(shù)的研究進(jìn)展13-19
• 1.1 外植體的研究13-14
• 1.1.1 外植體的低溫預(yù)處理13-14
• 1.1.2 外植體的切法14
• 1.2 水仙離體培養(yǎng)類型的研究14-15
• 1.2.1 營(yíng)養(yǎng)器官培養(yǎng)14-15
• 1.2.2 生殖器官培養(yǎng)15
• 1.3 基本培養(yǎng)基的篩選15-16
• 1.4 激素種類與濃度的研究16-19
• 1.4.1 初代培養(yǎng)中激素的研究16-18
• 1.4.2 繼代培養(yǎng)中激素影響的研究18
• 1.4.3 生根培養(yǎng)中激素的研究18-19
• 1.5 培養(yǎng)環(huán)境的研究19
• 2 WD40蛋白在植物中的研究進(jìn)展19-21
• 2.1 WD40蛋白的結(jié)構(gòu)特征20
• 2.2 WD40與植物花青素合成20-21
• 2.3 WD40與植物非生物脅迫21
• 3 研究意義和內(nèi)容21-23
• 3.1 研究意義21-22
• 3.2 研究?jī)?nèi)容22-23
• 第二章 水仙快繁技術(shù)23-38
• 1 材料與方法23-26
• 1.1 試驗(yàn)材料23
• 1.2 方法23-26
• 1.2.1 外植體預(yù)處理及消毒23-24
• 1.2.2 培養(yǎng)基與培養(yǎng)條件24
• 1.2.3 外植體的接種24-25
• 1.2.4 繼代增殖培養(yǎng)25
• 1.2.5 生根與壯苗培養(yǎng)25
• 1.2.6 煉苗和移栽25-26
• 2 結(jié)果與分析26-34
• 2.1 不同處理的消毒效果比較26-27
• 2.1.1 ‘云香水仙’消毒方法的篩選26
• 2.1.2 白花Ⅱ水仙消毒方法的篩選26-27
• 2.2 初代培養(yǎng)27-31
• 2.2.1 ‘云香水仙’鱗莖生長(zhǎng)及分化的相關(guān)性分析27-29
• 2.2.2 白花Ⅱ水仙不定芽生長(zhǎng)及分化的相關(guān)性分析29-30
• 2.2.3 最佳激素濃度的確定30-31
• 2.3 愈傷組織分化培養(yǎng)31-32
• 2.3.1 ‘云香水仙’愈傷組織的分化31-32
• 2.3.2 白花Ⅱ水仙愈傷組織的分化32
• 2.4 不同激素對(duì)水仙繼代培養(yǎng)的影響32-33
• 2.4.1 ‘云香水仙’小鱗莖的繼代33
• 2.4.2 白花Ⅱ水仙不定芽的繼代33
• 2.5 激素對(duì)水仙生根的影響33-34
• 2.6 組培苗的移栽34
• 3 討論34-38
• 3.1 消毒效果的比較34-35
• 3.2 激素濃度配比對(duì)水仙離體培養(yǎng)的影響35-36
• 3.3 外植體對(duì)初代培養(yǎng)的影響36
• 3.4 生根與移栽36-37
• 3.5 組培過(guò)程中遇到的問(wèn)題37-38
• 第三章 WD40基因克隆及表達(dá)分析38-51
• 1 試驗(yàn)材料38-39
• 1.1 植物材料38
• 1.2 酶和試劑38-39
• 1.3 載體和菌株39
• 1.4 主要儀器設(shè)備和耗材39
• 2 試驗(yàn)方法39-43
• 2.1 非生物脅迫39-40
• 2.2 RNA提取40
• 2.3 RNA質(zhì)量檢測(cè)40
• 2.4 基因克隆40-42
• 2.4.1 cDNA合成40
• 2.4.2 引物設(shè)計(jì)40-41
• 2.4.3 PCR擴(kuò)增41
• 2.4.4 目的片段回收41
• 2.4.5 目的片段連接41
• 2.4.6 轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)41
• 2.4.7 陽(yáng)性克隆的篩選與鑒定41-42
• 2.4.8 基因片段的測(cè)序與分析42
• 2.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)42-43
• 2.5.1 cDNA合成42
• 2.5.2 qPCR42-43
• 3 結(jié)果與分析43-49
• 3.1 ‘云香水仙’WD40基因的克隆和序列分析43-47
• 3.1.1 RNA質(zhì)量43-44
• 3.1.2 WD40的克隆44
• 3.1.3 WD40基因的生物信息學(xué)分析44-47
• 3.2 ‘云香水仙’WD40基因表達(dá)分析47-49
• 3.2.1 RNA質(zhì)量47
• 3.2.2 ‘云香水仙’WD40基因在不同非生物脅迫下的表達(dá)水平47-49
• 4 討論49-51
• 第四章 小結(jié)與展望51-53
• 1 小結(jié)51
• 2 展望51-53
• 參考文獻(xiàn)53-59
• 附錄Ⅰ 熒光定量樣品OD值59-60
• 附錄Ⅱ qPCR計(jì)算結(jié)果60-61
• 附錄Ⅲ 白花Ⅱ水仙離體快繁過(guò)程61-63
• 附錄Ⅳ ‘云香水仙’離體快繁過(guò)程63-66
• 致謝66

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