中華蜜蜂是我國獨特的本土蜂種,具有重要的經(jīng)濟價值和社會效益。然而,由于各種外界脅迫的影響,其生存受到嚴(yán)重威脅,種群數(shù)量不斷降低。為了更好地保護中華蜜蜂這一珍貴的種質(zhì)資源,利用分子生物學(xué)手段研究其體內(nèi)的抗逆相關(guān)基因勢在必行。絲裂原活化蛋白激酶磷酸酶（MAP kinase phosphatases,MKPs）和載脂蛋白D（Apolipoprotein D,ApoD）能夠參與細胞對多種刺激的響應(yīng),在生長發(fā)育、免疫反應(yīng)、氧化應(yīng)激以及各種疾病相關(guān)的生理反應(yīng)過程中都扮演著重要角色。本研究以中華蜜蜂為實驗材料,分離得到了AccMKP3和AccApoD兩個基因,并對其進行了一系列的功能分析。主要研究結(jié)果如下:（1）通過RT-PCR的方法獲得AccMKP3和AccApoD基因的編碼區(qū)序列。AccMKP3基因的編碼區(qū)序列長度為1203bp,編碼400個氨基酸,預(yù)測其蛋白分子量和等電點分別為43.9kDa和4.90。AccApoD基因的編碼區(qū)序列為714bp,編碼237個氨基酸,預(yù)測其蛋白分子量和等電點分別為27.7kDa和8.42。（2）通過氨基酸序列比對和進化樹分析發(fā)現(xiàn),MKP3和ApoD的序列都在不同... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：83 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

AccMKP3基因的PCR擴增電泳圖

34圖 3-2AccMKP3 的氨基酸序列比對分析保守區(qū)域以黑色陰影突出顯示。將保守的催化結(jié)構(gòu)域用黑色線框住，并用黑色圓點標(biāo)記相應(yīng)的氨基酸殘基。關(guān)鍵的 KIM 基序用直線標(biāo)出。Fig. 3-2 Multiple sequence alignment of AccMKP3Conserved regions are shaded in black. The conserved catalytic domain is boxed, and the corresponding amino acidresidues are marked with black dots. The critical KIM motif is indicated by a horizontal line.為了進一步探索中華蜜蜂 AccMKP3 與 DUSP 家族不同成員之間的進化關(guān)系，本研究利用 MEGA 4.1 軟件構(gòu)建了一個系統(tǒng)進化樹。如圖 3-3 所示，可以看出中華蜜蜂AccMKP3 在進化關(guān)系上與同屬于 MKP 亞族的意大利蜜蜂 AmMKP3 最為密切。

圖 3-3AccMKP3 的進化樹分析通過軟件 MEGA4.0 以及鄰接法（NJ）構(gòu)建進化樹。所有的氨基酸序列均從 NCBI 數(shù)據(jù)庫獲得。圖中顯示了 DUSP家族的 6 個分類，其中 AccMKP3 以黑色方框突出顯示。Fig. 3-3 Phylogenetic analysis of AccMKP3The phylogenetic tree was constructed by MEGA version 4.0 with the neighbor-joining (NJ) method. All amino acidsequences were obtained from the NCBI database. Six main groups of the DUSP superfamily are shown, and AccMKP3 isboxed.3.1.3 AccMKP3 基因啟動子序列分析為了探究中華蜜蜂 AccMKP3 基因的生物學(xué)功能，本研究從 NCBI 數(shù)據(jù)庫獲得了位于其轉(zhuǎn)錄起始位點上游 1094bp 的啟動子序列，并通過啟動子預(yù)測網(wǎng)站 TFBIND INPUT對這段序列進行了轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點分析。如圖 3-4 所示，啟動子區(qū)域顯示有多個與調(diào)節(jié)環(huán)境脅迫及免疫反應(yīng)相關(guān)的順式作用元件，包括熱休克因子（HSF），cAMP 反應(yīng)元件結(jié)合蛋白（CREB），激活蛋白-1（AP-1），p53，Nkx-Ⅱ和 NFκB 等（Lee et al., 2018;Li et al., 2018a; Mazaira et al., 2018）。另外，在該啟動子區(qū)域還發(fā)現(xiàn)了一些與胚胎或組

【參考文獻】：
期刊論文
[1]小而密低密度脂蛋白膽固醇在心腦血管系統(tǒng)相關(guān)疾病中的意義[J]. 王勝奎,周俊.  檢驗醫(yī)學(xué). 2019(01)
[2]中華蜜蜂重要生物學(xué)特性相關(guān)功能基因研究進展[J]. 孟飛,胥保華,郭興啟.  應(yīng)用昆蟲學(xué)報. 2012(05)

碩士論文
[1]中華蜜蜂（Apis cerana）群體多樣性的研究[D]. 丁桂玲.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 2006



本文編號：2966442