多粘類芽孢桿菌（Paenibacillus polymyxa）是一類功能良好的植物根際促生細(xì)菌（PGPR）,因其在農(nóng)業(yè)上的生防作用越來越受到人們關(guān)注。本實(shí)驗(yàn)室篩選得到一株多粘類芽孢桿菌SC2,胞外多糖生產(chǎn)能力強(qiáng),有很強(qiáng)的植物病原菌抗性,多粘類芽孢桿菌SC2的全基因組已完成測序,其分子生物學(xué)信息較豐富。SC2可產(chǎn)生多糖等胞外分泌物,不利于分子操作,而其自然突變株SC2-M1相對容易操作,可作為分子生物學(xué)遺傳操作表達(dá)體系工具菌株。構(gòu)建可在SC2-M1中穩(wěn)定表達(dá)外源基因的載體,為研究SC2提供可行的分子生物學(xué)手段。本研究利用木糖異構(gòu)酶和gfp基因在SC2-M1中超表達(dá),驗(yàn)證構(gòu)建載體在SC2-M1中的活性。pHY300PLK質(zhì)粒上不含啟動(dòng)子和信號肽基因,常被用作啟動(dòng)子、信號肽等元件的表達(dá)載體,是常用的大腸桿菌（Escherichia coli）-枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）的穿梭質(zhì)粒。通過在多粘類芽孢桿菌SC2-M1中轉(zhuǎn)化質(zhì)粒pGFP4412,確定pGFP4412上的gfp基因可在多粘類芽孢桿菌SC2-M1中穩(wěn)定表達(dá)。從pGFP4412上擴(kuò)增的gfp全基因表達(dá)框插入到質(zhì)粒... 

【文章來源】：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

多粘菌素的結(jié)構(gòu)示意圖

圖 1-1 多粘菌素的結(jié)構(gòu)示意圖Fig. 1-1 Polymyxin structureusaricidins）是一種與多粘菌素相似的環(huán)狀、D 四種分子量在 800-900Da 之間抗菌多肽（殺鐮孢菌素對尖孢鐮刀菌（Raza et al., 2009珠菌（Kajimura et al., 1997）、釀酒酵母菌等泛應(yīng)用于防治植物病害，尤其是在防治黃瓜枯8），在農(nóng)業(yè)的應(yīng)用上前景廣闊。殺鐮孢菌素（五烷酸和 6 個(gè)氨基酸殘基組成，在肽鏈上有 2、X3，圖 1-2 為殺鐮孢菌素結(jié)構(gòu)圖。編碼殺，從已完成測序的多粘類芽孢桿菌 E681、SC成殺鐮孢菌素的過程中起著重要的作用（Ch

多粘類芽孢桿菌 SC2 的基因表達(dá)體系優(yōu)化不同，這些微生物的木糖代謝途徑也不盡相同。如圖 1-3 所示途徑。這兩種代謝途徑分別為：（1）在酵母等真菌中普遍存氫酶途徑（簡稱 XR-XDH 途徑）；（2）在大腸桿菌和芽孢桿遍存在的另外一條途徑—木糖異構(gòu)酶（xylose isomerase, XI）R-XDH 途徑是指在依賴 NADPH 的木糖還原酶（xylose reduc還原為木糖醇，隨后在利用 NAD+的木糖醇脫氫酶（xylitol de被氧化為木酮糖，再經(jīng)木酮糖激酶（xylulokinase, XK）的磷酸后進(jìn)入非氧化磷酸戊糖途徑（pentose phosphate pathway, PPP）-磷酸甘油醛的形式進(jìn)入糖酵解途徑（Glycolysis），在無氧條糖通過木糖異構(gòu)酶（xylose isomerase, XI）一步轉(zhuǎn)化為木酮糖磷酸戊糖途徑，最終被轉(zhuǎn)化為乙醇。

【參考文獻(xiàn)】：
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