本文關(guān)鍵詞：基于果蠅模式生物的幼年期睡眠剝奪對(duì)其成年后睡眠的影響及基因表達(dá)的變化研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：探討幼年期睡眠剝奪對(duì)其成年后睡眠的影響及基因表達(dá)的變化。方法：第一部分 果蠅幼年期及成年后睡眠特征的研究一、果蠅幼年期睡眠特征的研究選取2日齡野生型CS品系雄性黑腹果蠅32只,利用DAMS果蠅活動(dòng)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)的監(jiān)測(cè)方法,連續(xù)記錄果蠅的幼年期(2-6日齡)睡眠,以果蠅睡眠時(shí)間、睡眠-覺(jué)醒節(jié)律作為評(píng)價(jià)指標(biāo),研究果蠅幼年期的睡眠特征。二、果蠅成年后睡眠特征的研究承接幼年期果蠅繼續(xù)進(jìn)行監(jiān)測(cè),利用DAMS果蠅活動(dòng)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)的監(jiān)測(cè)方法,連續(xù)記錄果蠅的成年后(7-40日齡)睡眠,以果蠅睡眠時(shí)間、睡眠-覺(jué)醒節(jié)律作為評(píng)價(jià)指標(biāo),研究果蠅成年后的睡眠特征。第二部分 機(jī)械性剝奪果蠅幼年期睡眠對(duì)其成年后睡眠特征的影響研究一、機(jī)械性剝奪對(duì)果蠅幼年期睡眠特征的影響研究選取2日齡野生型CS品系雄性黑腹果蠅32只,利用DAMS果蠅活動(dòng)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)的監(jiān)測(cè)方法,連續(xù)記錄SNAS機(jī)械刺激剝奪果蠅的幼年期(2-6日齡)睡眠,以果蠅睡眠時(shí)間、睡眠-覺(jué)醒節(jié)律作為評(píng)價(jià)指標(biāo),研究機(jī)械性剝奪對(duì)果蠅幼年期睡眠特征的影響。二、機(jī)械性剝奪果蠅幼年期睡眠對(duì)其成年后睡眠特征的影響承接機(jī)械性剝奪的幼年期果蠅繼續(xù)進(jìn)行監(jiān)測(cè),利用DAMS果蠅活動(dòng)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)的監(jiān)測(cè)方法,連續(xù)記錄果蠅的成年后(7-40日齡)睡眠,以果蠅睡眠時(shí)間、睡眠-覺(jué)醒節(jié)律作為評(píng)價(jià)指標(biāo),研究機(jī)械性剝奪果蠅幼年期睡眠對(duì)其成年后睡眠特征的影響。第三部分 機(jī)械性剝奪對(duì)4日齡和20日齡果蠅腦部睡眠特征相關(guān)基因表達(dá)差異的影響研究一、機(jī)械性剝奪對(duì)4日齡果蠅腦部睡眠特征相關(guān)基因表達(dá)差異的影響研究選取2日齡野生型CS品系雄性黑腹果蠅,隨機(jī)分為空白組和模型組,各組96只。利用果蠅活動(dòng)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)及SNAS機(jī)械刺激剝奪裝置對(duì)果蠅進(jìn)行睡眠剝奪至4日齡晚上20：00整,取此時(shí)間點(diǎn)果蠅頭部為樣品,利用NGS的Illumina測(cè)序平臺(tái),建立機(jī)械剝奪4日齡果蠅頭部轉(zhuǎn)錄表達(dá)譜,以果蠅基因表達(dá)差異為評(píng)價(jià)指標(biāo),重點(diǎn)分析與睡眠有關(guān)的基因。從而研究機(jī)械性剝奪對(duì)果蠅幼年期睡眠特征影響的機(jī)制。二、機(jī)械性剝奪對(duì)20日齡果蠅腦部睡眠特征相關(guān)基因表達(dá)差異的影響研究選取2日齡野生型CS品系雄性黑腹果蠅,隨機(jī)分為空白組和模型組,各組96只。利用果蠅活動(dòng)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)及SNAS機(jī)械刺激剝奪裝置對(duì)果蠅進(jìn)行睡眠剝奪至4日齡晚上20：00整后繼續(xù)在監(jiān)測(cè)管中飼養(yǎng),于20日齡晚上20：00整取此時(shí)間點(diǎn)果蠅頭部為樣品,利用NGS的Illumina測(cè)序平臺(tái),建立機(jī)械剝奪20日齡果蠅頭部轉(zhuǎn)錄表達(dá)譜,以果蠅基因表達(dá)差異為評(píng)價(jià)指標(biāo),重點(diǎn)分析與睡眠有關(guān)的基因。以果蠅基因表達(dá)差異為評(píng)價(jià)指標(biāo),研究機(jī)械性剝奪果蠅幼年期睡眠對(duì)其成年后睡眠特征影響的機(jī)制。結(jié)果：第一部分果蠅幼年期及成年后睡眠特征的研究一、果蠅幼年期睡眠特征的研究1、平均睡眠時(shí)間方面：實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：果蠅幼年期白天平均睡眠時(shí)間在2-5日齡呈現(xiàn)下降趨勢(shì)6日齡呈現(xiàn)上升的趨勢(shì),與2日齡相比較,3日齡果蠅白天平均睡眠時(shí)間下降明顯；夜晚平均時(shí)間在呈現(xiàn)先上升后下降再上升后平緩下降的趨勢(shì),與2日齡相比較,3日齡果蠅夜晚平均時(shí)間上升明顯；全天平均睡眠時(shí)間呈現(xiàn)先下降后平緩的趨勢(shì)。在連續(xù)5天的監(jiān)測(cè)中,與前一日齡比較,果蠅第3日齡白天平均睡眠時(shí)間縮短,兩者比較具有顯著性差異(p0.05)；夜晚平均睡眠時(shí)間延長(zhǎng),兩者比較具有顯著性差異(p0.05)。其余日齡白天、夜晚、全天平均睡眠時(shí)間均沒(méi)有顯著性差異(p0.05)。2、睡眠-覺(jué)醒節(jié)律方面：實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：2日齡果蠅的睡眠-覺(jué)醒呈現(xiàn)晝夜節(jié)律變化,且睡眠呈現(xiàn)片段化。在7：00和19：00明暗交替前后出現(xiàn)覺(jué)醒高峰,其覺(jué)醒狀態(tài)約持續(xù)3小時(shí)。其中白天平均睡眠時(shí)間為457.19min,其睡眠特征為8：30-17：00集中出現(xiàn)睡眠。夜晚平均睡眠時(shí)間為417.66min,低于白天平均睡眠時(shí)間,其睡眠特征為20：00-5：30集中出現(xiàn)睡眠。其他日齡果蠅與2日齡果蠅睡眠-覺(jué)醒節(jié)律基本相同,但3日齡在平均睡眠時(shí)間上與2日齡比較白天平均睡眠時(shí)間縮短,夜晚平均睡眠時(shí)間延長(zhǎng),具有顯著性差異,夜晚平均睡眠時(shí)間高于白天平均睡眠時(shí)間。其余日齡果蠅夜晚平均睡眠時(shí)間均高于白天平均睡眠時(shí)間。二、果蠅成年后的睡眠特征的研究1、平均睡眠時(shí)間方面：實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：果蠅成年后白天、夜晚、全天平均睡眠時(shí)間均呈現(xiàn)上升的總趨勢(shì)。在連續(xù)34天的監(jiān)測(cè)中,與前一日齡各平均睡眠時(shí)間比較,果蠅第9日齡白天平均睡眠時(shí)間縮短,兩者比較具有顯著性差異(p0.05)；第12日齡、18日齡夜晚平均睡眠時(shí)間延長(zhǎng),各自與前一日齡各平均睡眠時(shí)間比較,兩者比較具有顯著性差異(p0.05)。其余日齡白天、夜晚、全天平均睡眠時(shí)間均沒(méi)有顯著性差異(p0.05)。2、睡眠-覺(jué)醒節(jié)律方面：實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：7日齡果蠅的睡眠-覺(jué)醒呈現(xiàn)晝夜節(jié)律變化,且睡眠呈現(xiàn)片段化。在7：00和19：00明暗交替前后出現(xiàn)覺(jué)醒高峰,其覺(jué)醒狀態(tài)約持續(xù)3小時(shí)。其中白天平均睡眠時(shí)間為399.53min,其睡眠特征為8：30-17：00集中出現(xiàn)睡眠。夜晚平均睡眠時(shí)間為442.81min,高于白天平均睡眠時(shí)間,其睡眠特征為20：00-5：30集中出現(xiàn)睡眠。8～30日齡果蠅與7日齡果蠅睡眠-覺(jué)醒節(jié)律基本相同,但16-30日齡果蠅的覺(jué)醒高峰持續(xù)時(shí)間與7日齡果蠅相比有所延長(zhǎng)。9日齡果蠅在平均睡眠時(shí)間上與8日齡比較白天平均睡眠時(shí)間縮短具有顯著性差異,12日齡、18日齡果蠅在夜晚平均睡眠時(shí)間上與各自前一日齡比較延長(zhǎng)具有顯著性差異。31日齡果蠅與30日齡果蠅睡眠-覺(jué)醒節(jié)律不同,31日齡果蠅的睡眠-覺(jué)醒未呈現(xiàn)明顯晝夜節(jié)律變化,且睡眠呈現(xiàn)片段化增多。在7：00和19：00明暗交替前后未出現(xiàn)明顯覺(jué)醒高峰,其中白天平均睡眠時(shí)間為537.81min,其睡眠特征為睡眠呈現(xiàn)片段化出現(xiàn)。夜晚平均睡眠時(shí)間為595.94min,高于白天平均睡眠時(shí)間,其睡眠特征為睡眠呈現(xiàn)片段化出現(xiàn)。32-40日齡31日齡果蠅睡眠-覺(jué)醒節(jié)律基本相同。第二部分機(jī)械性剝奪果蠅幼年期睡眠對(duì)其成年后睡眠特征的影響研究一、機(jī)械性剝奪果蠅幼年期睡眠對(duì)其幼年期睡眠特征的影響1、平均睡眠時(shí)間方面：實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：機(jī)械性剝奪果蠅幼年期白天平均睡眠時(shí)間呈現(xiàn)先平緩后下降再上升再下降的變化趨勢(shì),與3日齡相比較,4日齡果蠅白天平均睡眠時(shí)間下降明顯,與4日齡相比較,5日齡果蠅白天平均睡眠時(shí)間上升明顯,與5日齡相比較,6日齡果蠅白天平均睡眠時(shí)間下降明顯；夜晚平均時(shí)間呈現(xiàn)上升的趨勢(shì),與5日齡相比較,6日齡果蠅夜晚平均時(shí)間上升明顯；全天平均睡眠時(shí)間呈現(xiàn)先上升后下降再上升的趨勢(shì),與4日齡相比較,5日齡果蠅全天平均時(shí)間上升明顯,與5日齡相比較,6日齡果蠅全天平均時(shí)間上升明顯。在連續(xù)5天的監(jiān)測(cè)中,與前一日齡比較,果蠅第4、6日齡白天平均睡眠時(shí)間縮短,兩者比較具有極顯著性差異(p0.01)；第5日齡白天平均睡眠時(shí)間延長(zhǎng),兩者比較具有極顯著性差異(p0.01)；第6日齡夜晚平均睡眠時(shí)間延長(zhǎng),兩者比較具有極顯著性差異(p0.01)。第5日齡全天平均睡眠時(shí)間延長(zhǎng),兩者比較具有極顯著性差異(p0.01)；第6日齡全天平均睡眠時(shí)間延長(zhǎng),兩者比較具有顯著性差異(p0.05),其余日齡果蠅白天、夜晚、全天平均睡眠時(shí)間均沒(méi)有顯著性差異(p0.05)。2、睡眠-覺(jué)醒節(jié)律方面：實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：2日齡果蠅的睡眠-覺(jué)醒呈現(xiàn)新晝夜節(jié)律變化,白天睡眠呈現(xiàn)片段化,夜晚受機(jī)械剝奪影響,夜晚連續(xù)活動(dòng)時(shí)間明顯增加。在7：00和19：00明暗交替前后出現(xiàn)覺(jué)醒高峰,其覺(jué)醒狀態(tài)約持續(xù)3小時(shí)。其中白天平均睡眠時(shí)間為407.65min,其睡眠特征為8：30-17：00集中出現(xiàn)睡眠。夜晚平均睡眠時(shí)間為211.41 min,低于白天平均睡眠時(shí)間,其睡眠特征為22：00-4：00有睡眠狀態(tài)。3日齡果蠅與2日齡果蠅睡眠睡眠-覺(jué)醒節(jié)律不同,睡眠-覺(jué)醒呈現(xiàn)新晝夜節(jié)律變化,白天睡眠呈現(xiàn)集中化與片段化同時(shí)出現(xiàn),夜晚受機(jī)械剝奪影響,夜晚連續(xù)活動(dòng)時(shí)間明顯增加。在7：00和19：00明暗交替前后出現(xiàn)覺(jué)醒高峰,其覺(jué)醒狀態(tài)約持續(xù)5小時(shí)。其中白天平均睡眠時(shí)間為410.OOmin,其睡眠特征為8：30-12：00連續(xù)睡眠時(shí)間增加,出現(xiàn)集中的睡眠反跳現(xiàn)象,節(jié)律相位發(fā)生偏移。夜晚平均睡眠時(shí)間為246.41min,低于白天平均睡眠時(shí)間,其睡眠特征為22：00-4：00有睡眠狀態(tài)。4、5日齡與3日齡果蠅睡眠睡眠-覺(jué)醒節(jié)律基本相同。6日齡果蠅5日齡果蠅睡眠睡眠-覺(jué)醒節(jié)律不同,睡眠-覺(jué)醒呈現(xiàn)新晝夜節(jié)律變化,白天睡眠呈現(xiàn)集中化與片段化同時(shí)出現(xiàn),夜晚睡眠呈現(xiàn)片段化,夜晚受機(jī)械剝奪影響,夜晚連續(xù)活動(dòng)時(shí)間未明顯增加。在7：00和19：00明暗交替前后出現(xiàn)覺(jué)醒高峰,其覺(jué)醒狀態(tài)約持續(xù)3小時(shí)。其中白天平均睡眠時(shí)間為423.13min,其睡眠特征為8：30-12：00連續(xù)睡眠時(shí)間增加,出現(xiàn)集中的睡眠反跳現(xiàn)象,節(jié)律相位發(fā)生偏移。夜晚平均睡眠時(shí)間為439.06min,高于白天平均睡眠時(shí)間,其睡眠特征為20：00-5：30集中出現(xiàn)睡眠。二、機(jī)械性剝奪果蠅幼年期睡眠對(duì)其成年后睡眠特征的影響1、平均睡眠時(shí)間方面：實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：機(jī)械性剝奪果蠅幼年期睡眠其成年后白天、夜晚、全天平均睡眠時(shí)間均呈現(xiàn)上升的總趨勢(shì)。在連續(xù)34天的監(jiān)測(cè)中,與前一日齡比較,第12日齡、18日齡、29日齡夜晚平均睡眠時(shí)間延長(zhǎng),兩者比較具有顯著性差異(p0.05)。其余日齡白天、夜晚、全天平均睡眠時(shí)間均沒(méi)有顯著性差異(p0.05)。2、睡眠-覺(jué)醒節(jié)律方面：實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：7日齡果蠅的睡眠-覺(jué)醒呈現(xiàn)晝夜節(jié)律變化,且睡眠呈現(xiàn)片段化。在7：00和19：00明暗交替前后出現(xiàn)覺(jué)醒高峰,其覺(jué)醒狀態(tài)約持續(xù)3小時(shí)。其中白天平均睡眠時(shí)間為359.69min,其睡眠特征為8：30-17：00集中出現(xiàn)睡眠。夜晚平均睡眠時(shí)間為497.66min,高于白天平均睡眠時(shí)間,其睡眠特征為20：00-5：30集中出現(xiàn)睡眠。此部分結(jié)果與第一部分實(shí)驗(yàn)二中,7日齡果蠅睡眠-覺(jué)醒節(jié)律基本相同。8-25日齡果蠅與7日齡果蠅睡眠-覺(jué)醒節(jié)律基本相同,但11-15日齡與7日齡果蠅相比7：00前后節(jié)律相位偏移,睡眠狀態(tài)增多,覺(jué)醒高峰持續(xù)時(shí)縮短；16-25日齡果蠅的覺(jué)醒高峰持續(xù)時(shí)間與7日齡果蠅相比有所延長(zhǎng)。12、17、29日齡果蠅在夜晚平均睡眠時(shí)間上與各自前一日齡比較延長(zhǎng)具有顯著性差異。26日齡果蠅與25日齡果蠅睡眠-覺(jué)醒節(jié)律不同,26日齡果蠅的睡眠-覺(jué)醒未呈現(xiàn)明顯晝夜節(jié)律變化,且睡眠呈現(xiàn)片段化增多。在7：00和19：00明暗交替前后未出現(xiàn)明顯覺(jué)醒高峰,其中白天平均睡眠時(shí)間為560.94min,其睡眠特征為睡眠呈現(xiàn)片段化出現(xiàn)。夜晚平均睡眠時(shí)間為595.47min,高于白天平均睡眠時(shí)間,其睡眠特征為睡眠呈現(xiàn)片段化出現(xiàn)。26-40日齡與25日齡果蠅睡眠-覺(jué)醒節(jié)律基本相同。第三部分機(jī)械性剝奪睡眠對(duì)4日齡和20日齡果蠅腦部睡眠特征相關(guān)基因表達(dá)差異的影響研究一、機(jī)械性剝奪睡眠對(duì)4日齡果蠅腦部睡眠特征相關(guān)基因表達(dá)差異的影響研究實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：與空白組比較,模型組果蠅采用DEGseq進(jìn)行基因差異表達(dá)分析,選取|log2Ratio|≥1和q0.05的基因作為差異表達(dá)基因,共篩選出差異表達(dá)基因1521個(gè),其中表達(dá)上調(diào)基因1244個(gè),表達(dá)下調(diào)基因268個(gè)。與睡眠有關(guān)基因包括HK、Slo、Obp44a、Nf1、Obp99a等。二、機(jī)械性剝奪睡眠對(duì)20日齡果蠅腦部睡眠特征相關(guān)基因表達(dá)差異的影響研究實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：與空白組比較,模型組果蠅采用DEGseq進(jìn)行基因差異表達(dá)分析,選取|10g2Ratio|≥1和q0.05的基因作為差異表達(dá)基因,共篩選出差異表達(dá)基因1592個(gè),其中表達(dá)上調(diào)基因956個(gè),表達(dá)下調(diào)基因636個(gè)。與睡眠有關(guān)基因包括HK、Gr39b、Gr28b、Obp99a等。結(jié)論：1.幼年期和成年期的果蠅睡眠特征隨日齡增加有所改變。2.機(jī)械性剝奪果蠅幼年期睡眠對(duì)其睡眠特征有很大影響。主要表現(xiàn)為自身平均睡眠時(shí)間和睡眠-覺(jué)醒節(jié)律改變。其影響的作用機(jī)制與果蠅腦內(nèi)和睡眠密切相關(guān)的HK、Slo、Obp44a、Nf1基因表達(dá)量上調(diào)；Obp99a基因表達(dá)量下調(diào)有關(guān)。3.機(jī)械性剝奪果蠅幼年期睡眠對(duì)其成年后睡眠特征一定影響。主要表現(xiàn)為改變自身12、17、29日齡的平均睡眠時(shí)間,并且11-15日齡7：00前后節(jié)律相位偏移,25-30日齡睡眠-覺(jué)醒節(jié)律改變。其影響的作用機(jī)制與果蠅腦內(nèi)和睡眠密切相關(guān)的HK、Gr28b基因表達(dá)量上調(diào)；Obp99a、Gr39b基因表達(dá)量下調(diào)有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：幼年期 機(jī)械性剝奪 睡眠 果蠅 基因
【學(xué)位授予單位】：黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R740
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表5-6
• 中文摘要6-12
• ABSTRACT12-20
• 前言20-21
• 文獻(xiàn)綜述21-38
• 1 幼年期與睡眠21-23
• 1.1 幼年期21-22
• 1.2 幼年期的睡眠特征22
• 1.3 幼年期睡眠障礙對(duì)成年后的影響22-23
• 2 果蠅與睡眠23-26
• 2.1 果蠅的生物學(xué)特征23
• 2.2 果蠅在睡眠研究中的應(yīng)用23-26
• 3 基因與睡眠26-30
• 3.1 基因與睡眠26-27
• 3.2 果蠅的基因與睡眠27-30
• 4 第二代測(cè)序技術(shù)的研究概況30-32
• 4.1 基因測(cè)序技術(shù)的發(fā)展30
• 4.2 第二代測(cè)序技術(shù)簡(jiǎn)介30-31
• 4.3 第二代測(cè)序技術(shù)的優(yōu)勢(shì)31
• 4.4 第二代測(cè)序技術(shù)的流程31-32
• 5 課題研究思路與技術(shù)路線32-38
• 5.1 研究思路32-34
• 5.2 技術(shù)路線34-38
• 實(shí)驗(yàn)部分38-102
• 第一部分 果蠅幼年期及成年后睡眠特征的研究38-57
• 一、果蠅幼年期睡眠特征的研究38-47
• 1 實(shí)驗(yàn)材料38-39
• 2 實(shí)驗(yàn)環(huán)境39
• 3 實(shí)驗(yàn)方法39-42
• 4. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果42-46
• 5 小結(jié)46-47
• 二、果蠅成年后睡眠特征的研究47-57
• 1 實(shí)驗(yàn)材料47
• 2 實(shí)驗(yàn)環(huán)境47
• 3 實(shí)驗(yàn)方法47-48
• 4. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果48-56
• 5 小結(jié)56-57
• 第二部分 機(jī)械性剝奪果蠅幼年期睡眠對(duì)其成年后睡眠特征的影響研究57-74
• 一、機(jī)械性剝奪對(duì)果蠅幼年期睡眠特征的影響研究57-63
• 1 實(shí)驗(yàn)材料57-58
• 2 實(shí)驗(yàn)環(huán)境58
• 3 實(shí)驗(yàn)方法58-59
• 4. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果59-63
• 5 小結(jié)63
• 二、機(jī)械性剝奪果蠅幼年期睡眠對(duì)其成年后睡眠特征的影響研究63-74
• 1 實(shí)驗(yàn)材料63
• 2 實(shí)驗(yàn)環(huán)境63
• 3 實(shí)驗(yàn)方法63-64
• 4. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果64-73
• 5 小結(jié)73-74
• 第三部分 機(jī)械性剝奪對(duì)4日齡和20日齡果蠅腦部睡眠特征相關(guān)基因表達(dá)差異的影響研究74-102
• 一、機(jī)械性剝奪對(duì)4日齡果蠅腦部睡眠特征相關(guān)基因表達(dá)差異的影響研究74-92
• 1 實(shí)驗(yàn)材料74-75
• 2 實(shí)驗(yàn)環(huán)境75
• 3 實(shí)驗(yàn)方法75-78
• 4. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果78-92
• 二、機(jī)械性剝奪對(duì)20日齡果蠅腦部睡眠特征相關(guān)基因表達(dá)差異的影響研究92-102
• 1 實(shí)驗(yàn)材料92
• 2 實(shí)驗(yàn)環(huán)境92
• 3 實(shí)驗(yàn)方法92-93
• 4. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果93-101
• 5 小結(jié)101-102
• 討論102-104
• 結(jié)論104-105
• 展望105-106
• 參考文獻(xiàn)106-111
• 致謝111-112
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文112-114
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷114

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本文編號(hào)：286266