【摘要】：目的:本研究在針灸治療功能性便秘療效確切的基礎(chǔ)上,以前期結(jié)果為指導(dǎo),擬探討針刺大腸俞募穴治療功能性便秘的作用機(jī)制,是否受GDNF-PI3K-Akt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的影響,旨在為針刺俞募穴治療功能性便秘提供科學(xué)依據(jù),以利于臨床推廣應(yīng)用。方法:10只野生型小鼠設(shè)為對(duì)照組,13只GFRα1基因敲除小鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為2個(gè)組:其中模型組7只,針刺組6只。GFRα1基因敲除小鼠采用復(fù)方地芬諾酯灌胃法復(fù)制模型,總共造模14天。電針交替針刺同側(cè)天樞穴和大腸俞穴,每次治療30分鐘,1天1次,共連續(xù)治療5天。治療結(jié)束后,取胃、小腸,檢測(cè)胃排空率和小腸推進(jìn)率;取遠(yuǎn)端結(jié)腸,利用免疫組化、原位雜交、PCR及Western Blot等方法檢測(cè)GDNF-PI3K-Akt信號(hào)通路的表達(dá)水平。結(jié)果:1、胃腸傳輸功能檢測(cè):(1)胃排空率與對(duì)照組相比,模型組和針刺組小鼠胃排空率降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01,P0.01);針刺組與模型組相比,胃排空率變化不明顯,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。(2)小腸推進(jìn)率與對(duì)照組相比,模型組小腸推進(jìn)率降低(P0.05),針刺組小鼠小腸推進(jìn)率也降低(P0.01),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;針刺組與模型組相比,小腸推進(jìn)率變化不明顯,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2、GDNF-PI3K-Akt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路檢測(cè)(1)GDNF蛋白及其mRNA的表達(dá)與對(duì)照組比較,模型組結(jié)腸內(nèi)GDNF蛋白及其mRNA的表達(dá)具有下降趨勢(shì),但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05,P0.05);與模型組比較,針刺組GDNF蛋白及其mRNA的含量沒(méi)有顯著差異(P0.05,P0.05)。(2)Rai蛋白及其mRNA的表達(dá)與對(duì)照組比較,模型組結(jié)腸內(nèi)Rai蛋白及其mRNA的表達(dá)下調(diào)(P0.01,P0.01);與模型組比較,針刺組Rai蛋白及其mRNA的表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05,P0.05)。(3)RET蛋白及其mRNA的表達(dá)與對(duì)照組比較,模型組結(jié)腸內(nèi)RET蛋白表達(dá)下調(diào)(P0.01),RET mRNA的含量有下降趨勢(shì),但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與模型組比較,針刺組RET蛋白及其mRNA的含量無(wú)顯著差異(P0.05,P0.05)。(4)PI3K、Akt表達(dá)水平與對(duì)照組比較,模型組結(jié)腸內(nèi)PI3K蛋白和Akt蛋白的含量升高(P0.01,P0.01);與模型組比較,針刺組PI3K蛋白和Akt蛋白的表達(dá)水平下調(diào)(P0.05,P0.05)。結(jié)論:1、GFRα1基因敲除后,針刺大腸俞募穴對(duì)功能性便秘小鼠胃腸動(dòng)力的改善作用不明顯。2、GFRα1基因敲除后,針刺大腸俞募穴對(duì)功能性便秘小鼠GDNF-PI3K-Akt信號(hào)通路各分子表達(dá)水平的調(diào)控作用不明顯。從反面證實(shí)了GDNF-PI3K-Akt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路可能是針刺大腸俞募穴治療功能性便秘的重要路徑。3、GDNF并非是介導(dǎo)PI3K-Akt信號(hào)通路的唯一作用分子,針刺大腸俞募穴對(duì)PI3K-Akt信號(hào)通路表達(dá)的影響可能包含其他路徑。
【學(xué)位授予單位】：成都中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R245

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2625826