本文關(guān)鍵詞：轉(zhuǎn)基因生物安全監(jiān)管模式及我國轉(zhuǎn)基因生物安全立法研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《揚(yáng)州大學(xué)》 2014年

共表達(dá)H5亞型禽流感病毒HA基因和雞IL-6基因重組雞痘病毒的生物安全評(píng)價(jià)

婁亞坤  

【摘要】：禽流感病毒(Avian influenza virus, AIV)已成為危害養(yǎng)殖業(yè)、公共衛(wèi)生的重要病原之 滅活疫苗雖然在禽流感的防控中起到重要作用,但存在僅能誘導(dǎo)體液免疫、成本高等缺點(diǎn)。因此,研究者們正著力研制新型的基因上程疫苗。以雞痘病毒為載體表達(dá)外源抗原蛋白的重組疫苗研究已十分成熟。目前對(duì)重組雞痘病毒疫苗的免疫原性研究較多,對(duì)其生物安全評(píng)價(jià)較少,同時(shí),重組活載體疫苗的生物安全評(píng)價(jià)是疫苗能否應(yīng)用到臨床上關(guān)鍵因素。本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的共表達(dá)H5亞型禽流感病毒HA基因和雞IL-6基因重組雞痘病毒(Recombinant fowlpox virus,rFPV-HAIL6)在鴨體內(nèi)的免疫原性已經(jīng)得到驗(yàn)證,因此,有必要開展重組雞痘病毒在水禽體內(nèi)的生物安全評(píng)價(jià)。 1重組雞痘病毒的理化特性與生物學(xué)特性研究 rFPV與母本野生雞痘病毒(Fowlpox virus, FPV)疫苗株分別在不同溫度、pH、氯仿、胰酶等作用條件下研究rFPV的理化特性；rFPV與FPV等量感染單層CEF,連續(xù)傳代,計(jì)算各代次比例,來評(píng)價(jià)重組雞痘病毒與母本病毒的競爭性。試驗(yàn)結(jié)果表明,rFPV與FPV均對(duì)胰酶和氯仿敏感,在pH3-9的范圍內(nèi)具有一定的耐受性,對(duì)高溫敏感。與野生株共傳代,其復(fù)制競爭能力弱,因此,rFPV比野生雞痘病毒疫苗株具有更高的生物安全性。 2重組雞痘病毒免疫麻鴨的生物安全性評(píng)價(jià) 10日齡商品麻鴨隨機(jī)分成6組,每組40只,頸部皮下分別免疫rFPV-HAIL6105PFU/只(0.2mL),rFPV-HAIL6106PFU/只，rFPV-HA105PFU/只,FPV105PFU/只,高致病性H5N1亞型禽流感油乳劑滅活苗0.2mL/只,PBS0.2mL作為陰性對(duì)照,其中rFPV與FPV免疫組各有5只同居感染的麻鴨。在免疫后第1、7、14d采集麻鴨試驗(yàn)各組麻鴨外周血測定其血液理化指標(biāo)變化情況,在免疫的1、3、7d同時(shí)隨機(jī)撲殺3只做病毒體內(nèi)分布試驗(yàn)及組織病理學(xué)觀察；在免疫后21d每隔1w稱量實(shí)驗(yàn)各組的麻鴨體重分析rFPV對(duì)麻鴨增重影響；在免疫后21d測定同居感染試驗(yàn)麻鴨體內(nèi)針對(duì)FPV的ELISA抗體水平,評(píng)價(jià)rFPV的同居感染能力；在免疫后的1、3、7、14d采集實(shí)驗(yàn)各組的飼料、糞便、飲水、喉頭及泄殖腔棉拭子分離病毒,評(píng)價(jià)rFPV的水平傳播能力；在免疫后60d采集rFPV-HAIL6試驗(yàn)組免疫部位肌肉通過southern blot的方法評(píng)價(jià)重組痘病毒外源基因整合麻鴨染色體DNA的可能性；在動(dòng)物試驗(yàn)期間每隔1w采集試驗(yàn)各組麻鴨外周血通過HI或者ELISA的方法測定HA抗體和FPV抗體水平,評(píng)價(jià)rFPV所誘導(dǎo)的抗體水平消長；rFPV以105PFU接種10日齡麻鴨,在接種后4d采集接種部位肌肉,研磨,取研磨液接種10日齡麻鴨,如此盲傳5代次,取每代次的接種部位研磨液接種CEF分離病毒。 試驗(yàn)結(jié)果顯示,重組雞痘病毒對(duì)麻鴨的血液理化個(gè)別指標(biāo)有影響,2w后恢復(fù)至正常水平；組織病理學(xué)觀察未發(fā)現(xiàn)明顯病變；對(duì)麻鴨增重?zé)o影響；體內(nèi)分布試驗(yàn)顯示在麻鴨體內(nèi)除接種部位外其他組織臟器分離不到病毒,PCR可以檢測各個(gè)組織病毒核酸,免疫組化結(jié)果可以檢測到rFPV在各組臟器表達(dá)的外源蛋白；同居接觸不會(huì)水平傳播；未從飼料、糞便、飲水及棉拭子中分離到病毒不會(huì)污染周圍環(huán)境,對(duì)周圍環(huán)境安全；Southern blot試驗(yàn)表明,外源基因不會(huì)整合到麻鴨染色體DNA中；鴨體內(nèi)盲傳,只能從第一代次麻鴨體內(nèi)分離到病毒,表明病毒不能連續(xù)在鴨體內(nèi)傳播,不會(huì)發(fā)生毒力返強(qiáng)。 3重組雞痘病毒免疫鵝的安全性評(píng)價(jià) 重組雞痘病毒以106PFU免疫10日齡小鵝,同時(shí)設(shè)置PBS組作為陰性對(duì)照。在免疫后不同時(shí)間,通過血液的理化指標(biāo)和組織病理學(xué)觀察,來評(píng)價(jià)重組雞痘病毒對(duì)鵝的安全性。 試驗(yàn)結(jié)果表明,試驗(yàn)組鵝的各項(xiàng)理化指標(biāo)在免疫2w后恢復(fù)正常,各組織臟器微觀病理學(xué)觀察,未發(fā)現(xiàn)明顯病理變化。綜上所述,重組雞痘病毒對(duì)小鵝也顯示出良好的安全性。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：S852.65
【目錄】：

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8 陳靜;張志;杜元釗;劉秀梵;;我國雞痘病毒野毒重組株的流行初探[J];中國獸醫(yī)學(xué)報(bào);2008年04期

9 劉存霞;李昌;王茂鵬;胡樂鵬;靖杰;杜壽文;尹榮蘭;劉燕瑜;任靜強(qiáng);任大勇;孫丹丹;金寧一;;新型雞痘病毒穿梭載體的構(gòu)建及其體外表達(dá)[J];中國獸醫(yī)科學(xué);2012年05期

10 孫明琴;;雞痘病毒細(xì)胞培養(yǎng)方法的探索[J];山東畜牧獸醫(yī);2007年05期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 邵衛(wèi)星;彭大新;盧建紅;韋棟平;劉玉良;劉秀梵;;表達(dá)雞白細(xì)胞介素2重組雞痘病毒的構(gòu)建及其體外表達(dá)產(chǎn)物生物活性的檢測[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)成立20周年慶典暨第十次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（下）[C];2003年

2 金明蘭;金寧一;魯會(huì)軍;馬鳴瀟;鄭敏;李昌;計(jì)越;;重組雞痘病毒在哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)復(fù)制研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學(xué)分會(huì)暨中國免疫學(xué)會(huì)獸醫(yī)免疫分會(huì)第七次研討會(huì)論文集[C];2008年

3 石星明;王云峰;王玫;蘭德松;孫妍;曾偉偉;童光志;;雞傳染性支氣管炎重組雞痘病毒基因工程疫苗免疫產(chǎn)生期的研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)禽病學(xué)分會(huì)第十四次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

4 賈雷立;金寧一;王瑞琳;田明堯;陳義峰;魯會(huì)軍;金洪濤;鄭敏;;流感復(fù)合多表位重組雞痘病毒活載體疫苗的構(gòu)建及小鼠實(shí)驗(yàn)免疫研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第六屆理事會(huì)第二次會(huì)議暨教學(xué)專業(yè)委員會(huì)第六屆代表大會(huì)論文集[C];2006年

5 金寧一;劉毅;郭志儒;方厚華;古長慶;羅坤;夏志平;;IBDV VP2/VP0基因在重組雞痘病毒中的表達(dá)及實(shí)驗(yàn)免疫研究[A];第四屆中國畜牧獸醫(yī)青年科技工作者學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2001年

6 郭建順;金寧一;夏志平;金擴(kuò)世;徐敬龍;賈雷立;王凱;;重組雞痘病毒生物安全性評(píng)價(jià)的PCR方法的建立[A];人畜共患傳染病防治研究新成果匯編[C];2004年

7 金明蘭;金寧一;魯會(huì)軍;馬鳴瀟;鄭敏;劉慧娟;;口蹄疫重組雞痘病毒活載體疫苗vUTAL3CP1的構(gòu)建與遺傳穩(wěn)定性研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第六屆理事會(huì)第二次會(huì)議暨教學(xué)專業(yè)委員會(huì)第六屆代表大會(huì)論文集[C];2006年

8 任靜強(qiáng);朱占波;金擴(kuò)世;金寧一;魯會(huì)軍;;重組雞痘病毒外源基因表達(dá)的實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測方法建立[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)禽病學(xué)分會(huì)第十五次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

9 夏志平;金寧一;劉艷;季喜娟;;重組雞痘病毒vFV282疫苗株細(xì)胞免疫水平的研究[A];第六屆全國會(huì)員代表大學(xué)暨第11次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（下）[C];2005年

10 夏志平;金寧一;劉艷;季喜娟;;重組雞痘病毒vFV282疫苗株細(xì)胞免疫水平的研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)家畜傳染病學(xué)分會(huì)第六屆全國會(huì)員代表大會(huì)暨第11次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2005年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 金明蘭;口蹄疫病毒基因重組雞痘病毒活載體疫苗系統(tǒng)鑒定研究[D];吉林大學(xué);2007年

2 劉存霞;雞痘病毒282E4株基因組和蛋白質(zhì)組解析、載體構(gòu)建與HIV重組疫苗研究[D];吉林大學(xué);2013年

3 彭大新;表達(dá)雞馬立克氏病病毒糖蛋白B基因及共表達(dá)糖蛋白B和雞γ干擾素基因的重組雞痘病毒的構(gòu)建及其免疫保護(hù)作用[D];揚(yáng)州大學(xué);2001年

4 張紹杰;表達(dá)傳染性喉氣管炎病毒gB基因重組雞痘病毒的構(gòu)建及其免疫效力的研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2000年

5 程堅(jiān);表達(dá)和共表達(dá)H9亞型禽流感病毒血凝素基因和雞Ⅱ型干擾素基因的重組雞痘病毒[D];揚(yáng)州大學(xué);2001年

6 夏志平;共表達(dá)NDV F、IBDV VP0基因的重組雞痘病毒構(gòu)建及其實(shí)驗(yàn)免疫研究[D];中國人民解放軍軍需大學(xué);2002年

7 韋棟平;共表達(dá)新城疫病毒融合蛋白基因和H9亞型禽流感病毒血凝素基因的重組雞痘病毒及其免疫效力[D];揚(yáng)州大學(xué);2004年

8 邵衛(wèi)星;分別表達(dá)雞白細(xì)胞介素1β、白細(xì)胞介素2和骨髓單核細(xì)胞生長因子基因重組雞痘病毒的構(gòu)建及其對(duì)ND疫苗免疫效力的影響[D];揚(yáng)州大學(xué);2004年

9 沈國順;PRRSV、PCV2基因工程疫苗的構(gòu)建及實(shí)驗(yàn)免疫研究[D];吉林大學(xué);2007年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李霄;重組雞痘病毒腫瘤治療性疫苗的構(gòu)建及實(shí)驗(yàn)免疫研究[D];吉林大學(xué);2005年

2 周春紅;雞痘病毒高效表達(dá)載體的構(gòu)建及應(yīng)用[D];揚(yáng)州大學(xué);2001年

3 邵二波;雞痘病毒地方分離株的鑒定及致病性研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

4 郭建順;雞痘病毒分子生物學(xué)檢測方法的建立及其致病機(jī)理研究[D];吉林大學(xué);2005年

5 解勝男;一株高致死性雞痘病毒的分離鑒定及致病性分析[D];吉林大學(xué);2012年

6 劉文峰;一起雞痘病毒繼發(fā)葡萄球菌感染病例的診斷[D];吉林大學(xué);2014年

7 陳義鋒;多亞型多表位流感病毒核酸疫苗與重組雞痘病毒構(gòu)建及實(shí)驗(yàn)免疫研究[D];吉林大學(xué);2007年

8 任靜強(qiáng);重組雞痘病毒rFPV-F-VPO實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測方法的建立和應(yīng)用[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

9 田占成;表達(dá)傳染性支氣管炎病毒S1基因重組雞痘病毒的構(gòu)建及其免疫保護(hù)效力的研究[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

10 張浩;豬瘟病毒E0-E2基因重組雞痘病毒遺傳穩(wěn)定性和免疫劑量研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2008年

  本文關(guān)鍵詞：轉(zhuǎn)基因生物安全監(jiān)管模式及我國轉(zhuǎn)基因生物安全立法研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號(hào)：234454