本文關(guān)鍵詞：農(nóng)桿菌介導(dǎo)大豆遺傳轉(zhuǎn)化研究進展及轉(zhuǎn)基因作物現(xiàn)狀，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《上海交通大學(xué)》 2009年

農(nóng)桿菌介導(dǎo)的豌豆花瓣瞬間表達系統(tǒng)的建立及利用該系統(tǒng)對百脈根TCP基因亞細胞定位的研究

李超  

【摘要】： 蛋白質(zhì)在細胞中的定位與其功能和調(diào)控密切相關(guān)。為了簡化研究蛋白質(zhì)亞細胞定位步驟,減少實驗所需時間,本文利用農(nóng)桿菌原位注射的方法在豌豆花瓣中建立了瞬間表達系統(tǒng),并利用該系統(tǒng)對百脈根中控制花發(fā)育對稱性的TCP基因的亞細胞定位進行了研究。實驗結(jié)果表明,通過該系統(tǒng)最快可以在注射30小時后觀察到GUS基因的表達;百脈根TCP蛋白LjCYC1、LjCYC2、LjCYC3的C端與YFP融合后在細胞中的定位不同,其中部分結(jié)果符合預(yù)期,而這些TCP蛋白的N端與CFP融合后在細胞中的定位相似。共表達時,不同的融合蛋白會發(fā)生共定位,這提示我們百脈根TCP蛋白之間可能會發(fā)生相互作用。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：Q943.2
【目錄】：

摘要5-6

ABSTRACT6-10

1. 緒論10-37

1.1 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化植物細胞的機理10-15

1.2 瞬間表達技術(shù)在植物中的應(yīng)用15-19

1.2.1 瞬間表達技術(shù)簡介15

1.2.2 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化15-16

1.2.3 雙元Ti 載體（binary Ti vectors）與共轉(zhuǎn)化（cotransformation）16-17

1.2.4 基因槍17-18

1.2.5 原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化18-19

1.3 熒光蛋白標(biāo)簽技術(shù)在植物中的應(yīng)用19-22

1.3.1 熒光蛋白簡介19-21

1.3.2 熒光蛋白標(biāo)簽所在位置對定位結(jié)果的影響21-22

1.3.3 植物細胞中自發(fā)熒光對定位結(jié)果的影響22

1.4 蛋白質(zhì)向細胞核的運輸22-25

1.5 蛋白質(zhì)向內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的運輸25-26

1.6 ABC 模型與豌豆花的原基發(fā)育26-27

1.7 被子植物花的對稱性27-28

1.8 TCP 家族28-37

1.8.1 TCP 家族簡介28-29

1.8.2 CYC/DICH 基因29-31

1.8.3 CIN 基因31-32

1.8.4 豆科中的cyc-like 基因32-35

1.8.5 TB1 基因35

1.8.6 PCF 亞家族35-37

2. 材料與方法37-44

2.1 材料與方法37-44

2.1.1 植物材料及種植條件37

2.1.2 菌株和質(zhì)粒37

2.1.3 試劑37

2.1.4 引物合成37-38

2.1.5 過表達載體的構(gòu)建38-40

2.1.6 熱激法制備農(nóng)桿菌EHA105 感受態(tài)40-41

2.1.7 熱擊法轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌EHA10541

2.1.8 農(nóng)桿菌菌液注射侵染41-42

2.1.9 固定42-44

2.1.10.G US 染色43

2.1.11.D API 染色43-44

3. 實驗結(jié)果44-56

3.1 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的豌豆葉片中瞬間表達44-46

3.1.1 侵染后培養(yǎng)時間對葉片中瞬間表達結(jié)果的影響44-45

3.1.2 LjCYC1-GFP 及free GFP 在葉片中瞬間表達得到的亞細胞定位結(jié)果45-46

3.2 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的豌豆花瓣中瞬間表達46-56

3.2.1 侵染后培養(yǎng)時間對花瓣中瞬間表達結(jié)果的影響46-47

3.2.2 TCP 蛋白C 端與YFP 融合后的亞細胞定位47-50

3.2.3 TCP 蛋白N 端與CFP 融合后的亞細胞定位50-52

3.2.4 不同融合蛋白組合共轉(zhuǎn)化的結(jié)果52-56

4. 討論56-59

4.1 關(guān)于農(nóng)桿菌原位注射瞬間表達的優(yōu)勢及缺陷56-57

4.2 百脈根TCP 與熒光蛋白融合后的亞細胞定位57-59

4.2.1 LjCYC1-YFP 瞬間表達的定位與轉(zhuǎn)基因植株中觀察到的結(jié)果一致.57

4.2.2 CFP 與TCP 蛋白N 端融合可能干擾了TCP 蛋白向細胞核的運輸.57

4.2.3 百脈根TCP 蛋白間可能存在著相互作用57-59

參考文獻59-64

致謝64

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10 王磊;農(nóng)桿菌介導(dǎo)的CBF1基因轉(zhuǎn)化唐菖蒲的研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

  本文關(guān)鍵詞：農(nóng)桿菌介導(dǎo)大豆遺傳轉(zhuǎn)化研究進展及轉(zhuǎn)基因作物現(xiàn)狀，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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