發(fā)布時間：2016-12-16 18:02

  本文關(guān)鍵詞：農(nóng)桿菌介導(dǎo)大豆遺傳轉(zhuǎn)化研究進展及轉(zhuǎn)基因作物現(xiàn)狀，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《山西大學(xué)》 2011年

植物非組培轉(zhuǎn)化方法獲得轉(zhuǎn)基因植株

張婷婷  

【摘要】：植物基因遺傳轉(zhuǎn)化最常用的方法農(nóng)桿菌介導(dǎo)法和基因槍法已經(jīng)使轉(zhuǎn)基因作物的研究與開發(fā)取得了舉世矚目的成就。但這些方法依賴于組織培養(yǎng),操作復(fù)雜,所用儀器昂貴,對操作者和實驗設(shè)備都有很高的要求,難與常規(guī)育種相結(jié)合,因此植物非組培轉(zhuǎn)化方法的研究具有重要意義。本研究采用超聲波輔助花粉介導(dǎo)植物轉(zhuǎn)基因方法將抗逆性相關(guān)受體類蛋白基因(OsSIK1)導(dǎo)入不同品種玉米白交系,以期獲得對鹽堿性、干旱具有一定程度抗性的轉(zhuǎn)基因玉米材料,同時研究該方法在不同品種間轉(zhuǎn)化率差異。此外,本研究還采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的植物萌發(fā)種子基因轉(zhuǎn)化法,以大豆萌發(fā)種子為外源基因受體,將含有crylAc抗蟲基因的表達載體導(dǎo)入大豆中,以探討該方法在大豆上的可行性,并根據(jù)大豆的具體情況對轉(zhuǎn)化過程中的乙酰丁香酮濃度、超聲波功率等因素進行試驗,建立了適合于大豆的遺傳轉(zhuǎn)化體系。研究內(nèi)容及結(jié)果如下： 1.花粉介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化玉米 (1)采用超聲波輔助的花粉介導(dǎo)法,將含有OsSIK1基因的植物表達載體導(dǎo)入鄭58,98-2-19,昌7-2三個玉米自交系品種中,在當代直接得到了T0代轉(zhuǎn)化種子,其中鄭58結(jié)籽272粒(結(jié)實率63.4%),98-2-19結(jié)籽27粒(結(jié)實率14.1%),昌7-2結(jié)籽167粒(結(jié)實率31.2%)。 (2)T1代植株經(jīng)卡那霉素篩選和PCR檢測,最終得到的轉(zhuǎn)化植株數(shù)為：鄭58,35株(轉(zhuǎn)化率28.5%)：98-2-19,4株(轉(zhuǎn)化率20.0%)：昌7-2,20株(轉(zhuǎn)化率37.1%),初步外源基因已整合到玉米基因組中。 (3)T2代植株遺傳率為：鄭58,34.3%；98-2-19,12.5%；昌7-2,55.0%。通過對這3個自交系的轉(zhuǎn)化處理結(jié)實率、轉(zhuǎn)化率和導(dǎo)入基因遺傳率的比較分析,證明花粉介導(dǎo)法對不同自交系品種的轉(zhuǎn)化率間存在差異,自交系鄭58,昌7-2更適合采用花粉介導(dǎo)法進行遺傳轉(zhuǎn)化。 2.植物萌發(fā)種子基因轉(zhuǎn)化方法轉(zhuǎn)化大豆 (1)采用超聲波輔助的植物萌發(fā)種子基因轉(zhuǎn)化法,以大豆萌發(fā)種子為外源基因受體,將含有bar基因及cry1Ac基因的表達載體p3301ubiAc導(dǎo)入大豆中,通過除草劑篩選、PCR檢測,證明轉(zhuǎn)化率平均為6.9%。 (2)優(yōu)化大豆轉(zhuǎn)化體系：研究了乙酰丁香酮濃度、超聲波功率等因素對大豆轉(zhuǎn)化效率的影響,并確定了幼苗期噴施除草劑的本底篩選濃度。結(jié)果表明,當轉(zhuǎn)化的菌液濃度OD600為0.5～0.6,乙酰丁香酮的濃度為100μmol/L,超聲波功率為800W時轉(zhuǎn)化效率較高。 (3)用草丁膦濃度分別為1mg/L、1.5mg/L、2mg/L、3mg/L及5 mg/L的除草劑涂抹葉片,根據(jù)幼苗生長狀態(tài)確定最佳的除草劑篩選濃度為1.5mg/L。在三葉期使用1.5mg/L的除草劑濃度進行篩選,可以淘汰大量非轉(zhuǎn)基因和表達較弱的株系或個體,大大減少田間工作量及后期檢測工作。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：山西大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號】：Q943.2
【目錄】：

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中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 楊利;高淀粉玉米自交系淀粉合成生理基礎(chǔ)及雜種優(yōu)勢研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

2 文迪;玉米淀粉分解酶活性動態(tài)以及其相關(guān)基因時空表達分析[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

3 張婷婷;植物非組培轉(zhuǎn)化方法獲得轉(zhuǎn)基因植株[D];山西大學(xué);2011年

4 杜錦;鹽脅迫下不同基因型玉米的生物學(xué)特性及其遺傳規(guī)律的研究[D];天津農(nóng)學(xué)院;2010年

5 張慧杰;玉米再生體系的建立及SsBHMT基因遺傳轉(zhuǎn)化的初步研究[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

6 楊樹華;石竹自交系的初步選育與花藥培養(yǎng)的研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2003年

7 王光達;不同玉米品種抗病性與相關(guān)酶活性的研究[D];延邊大學(xué);2010年

8 陳巖;玉米品種抗旱篩選及不同基因型差異性分析[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2010年

9 許明陸;武陵山區(qū)玉米自交系的遺傳特性與育種潛力的研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2000年

10 張亞麗;利用SSR分子標記研究引進南斯拉夫玉米自交系的遺傳基礎(chǔ)及雜種優(yōu)勢預(yù)測[D];河南農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

  本文關(guān)鍵詞：農(nóng)桿菌介導(dǎo)大豆遺傳轉(zhuǎn)化研究進展及轉(zhuǎn)基因作物現(xiàn)狀，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：215715