本文關(guān)鍵詞：轉(zhuǎn)基因作物安全性評(píng)價(jià)與商品化前景分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院》 2014年

重組酶介導(dǎo)的等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)在轉(zhuǎn)基因檢測中的應(yīng)用

徐潮  

【摘要】：轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的不斷涌現(xiàn)引起了社會(huì)公眾對其安全性的廣泛關(guān)注。目前我國尚未批準(zhǔn)任何一種主糧轉(zhuǎn)基因作物，但是轉(zhuǎn)基因水稻的擴(kuò)散情況時(shí)有發(fā)生。為了保護(hù)消費(fèi)者的知情權(quán)和選擇權(quán)，迫切需要建立一種快速簡便的檢測方法，用于加強(qiáng)轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的安全管理。近年來核酸等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)得到了不斷的發(fā)展，它可以擺脫傳統(tǒng)的PCR儀，在短時(shí)間內(nèi)得到準(zhǔn)確的檢測結(jié)果。重組酶等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)（recombinase ploymerase amplification, RPA）是基于重組酶聚合酶介導(dǎo)的擴(kuò)增原理，模擬體內(nèi)DNA復(fù)制的酶反應(yīng)過程，對DNA模板進(jìn)行擴(kuò)增，可在39℃左右的恒溫條件下，20分鐘內(nèi)完成擴(kuò)增反應(yīng)。結(jié)合DNA快速提取技術(shù)，可使轉(zhuǎn)基因作物在野外快速檢測中具有廣泛的應(yīng)用前景。本研究主要建立了一種RPA快速檢測方法和一種基于磁珠法的DNA快速提取技術(shù)，其研究內(nèi)容和結(jié)果如下： 1. RPA等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)用于轉(zhuǎn)基因檢測研究：本研究選取了幾種轉(zhuǎn)基因檢測中的常用靶標(biāo)原件，如CaMV35S啟動(dòng)子、nos終止子、HPT基因以及Bt基因等，建立了RPA的凝膠和熒光快速檢測方法。結(jié)果證實(shí)，基于探針檢測的熒光RPA方法具有較高的靈敏度，可以穩(wěn)定檢測到100個(gè)分子拷貝數(shù)。同時(shí)熒光RPA方法適用性強(qiáng)，可以用于不同轉(zhuǎn)基因作物的成分檢測。15-25分鐘內(nèi)便可以得到穩(wěn)定、可靠的檢測結(jié)果。 2.磁珠快速提取植物DNA方法的建立：本研究利用三種便攜式DNA提取裝置，通過對提取條件的優(yōu)化，開發(fā)出植物總DNA快速粗提取方法。該方法可以在室溫條件下，20分鐘內(nèi)完成不同植物DNA的提取。結(jié)果證實(shí)磁珠法快速提取植物基因組DNA可以用于PCR檢測，同時(shí)還可以對0.1%的轉(zhuǎn)基因玉米MON810進(jìn)行品系特異性檢測。后續(xù)研究進(jìn)一步結(jié)合RPA熒光檢測技術(shù)，，成功的對轉(zhuǎn)基因水稻TT51-1進(jìn)行了nos終止子和Bt基因成分檢測，建立了適用于野外檢測的轉(zhuǎn)基因作物快速精準(zhǔn)檢測方法。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：Q78
【目錄】：

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本文編號(hào)：165276