本文關(guān)鍵詞：外源脫水應(yīng)答轉(zhuǎn)錄因子DREB基因在轉(zhuǎn)基因小麥中的誘導(dǎo)型表達(dá)與抗干旱生理效果研究(英文)，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《2005植物分子育種國(guó)際學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集》2005年

病原物誘導(dǎo)表達(dá)的Rs-AFP2基因轉(zhuǎn)化辣椒研究

朱昌叁  羅齊軍  胡木林  袁紅旭  曾富華  

【摘要】：辣椒(Capsicum annuum L.)屬于茄科,是一種重要的蔬菜作物和調(diào)料品,也可以作為園藝觀賞植物。但目前的栽培品種大多易受真菌、細(xì)菌、病毒和線蟲類的侵染而引起疫病、青枯病、斑葉病等多種病害,生產(chǎn)上的損失嚴(yán)重。隨著植物基因工程技術(shù)的發(fā)展和成熟,人們已越來(lái)越多地應(yīng)用該項(xiàng)技術(shù)來(lái)進(jìn)行蔬菜作物抗病品種的選育,包括番茄、馬鈴薯等的轉(zhuǎn)基因研究日益深入,成功的例子也日益增多。蘿卜抗真菌蛋白R(shí)s-AFPs 為蘿卜種子中富含半胱氨酸殘基的蛋白,可分為Rs-AFP1和Rs-AFP2兩類,具有較強(qiáng)的耐酸堿性和熱穩(wěn)定性。這類蛋白通過引起菌絲過度分枝或抑制菌絲頂端生長(zhǎng)而表現(xiàn)出有效的抗真菌活性。已有人將該蛋白基因置于組成型啟動(dòng)子或強(qiáng)啟動(dòng)子控制之下進(jìn)行超量表達(dá),在煙草、小麥等作物的抗真菌病基因工程中取得了較好的效果。不足之處在于,組成型啟動(dòng)子或強(qiáng)啟動(dòng)子控制下的Rs-AFP 基因在轉(zhuǎn)化植物體內(nèi)的高水平表達(dá),對(duì)植物本身而言是不經(jīng)濟(jì)的,會(huì)在相當(dāng)程度上降低作物的產(chǎn)量,對(duì)植物的生長(zhǎng)也有不利影響,如導(dǎo)致畸形或死亡;在生態(tài)環(huán)境良好、無(wú)病蟲害的生長(zhǎng)條件下,外源基因的高水平表達(dá)是完全沒有必要的。我們將Rs-AFP2基因置于馬鈴薯中克隆到的,具有很好的受病原真菌誘導(dǎo)的啟動(dòng)子片段prp1-1控制之下,通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化辣椒,以期獲得受病原真菌誘導(dǎo)表達(dá)的轉(zhuǎn)化植株。已取得初步結(jié)果:辣椒的遺傳轉(zhuǎn)化以子葉為外植體,在分化培養(yǎng)基上預(yù)培養(yǎng)2～3d,葉柄切口處略有膨大時(shí),用OD_(600)值為0.2～0.5的根癌農(nóng)桿菌浸染7～8min,外植體與農(nóng)桿菌在280C 的暗處共培養(yǎng)2～3d,經(jīng)選擇培養(yǎng)獲得抗性芽,分化率為55%,PCR 檢測(cè)目的基因已經(jīng)轉(zhuǎn)入辣椒體內(nèi)。誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基:MS 基本+6-BA 4.0mg/L(單位下同)+IAA0.5+AgNO_35共培養(yǎng)培養(yǎng)基:MS 基本+6-BA 4.0+IAA 0.5+AgNO_35選擇分化培養(yǎng)基:MS 基本+6-BA 4.0+IAA 0.5+AgNO_35+Kan 20+Cef 300繼代培養(yǎng)基:MS 基本IAA 0.5+AgNO~33+Cef300伸長(zhǎng)培養(yǎng)基:MS 基本+6-BA 2.0+IAA 0.2+AgNO_32+GA3 0.5選擇生根培養(yǎng)基:1/2 MS 基本+IAA 0.5+Kan 20以上培養(yǎng)基均加入3%蔗糖、0.8%瓊脂。pH5.8～5.9,培養(yǎng)室溫度26±2℃。光照時(shí)間10h/d,光照強(qiáng)度2000～2500Lux。在辣椒的遺傳轉(zhuǎn)化體系建立過程中,再生芽的伸長(zhǎng)困難往往會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗,我們通過添加辣椒幼苗提取液(4～5ml/L),較好地解決了該難題;配合添加AgNO_3則有助于防止褐化現(xiàn)象的出現(xiàn)。在農(nóng)桿菌侵染辣椒子葉外植體時(shí)添加了100μmol 的乙酰丁香酮有助于提高轉(zhuǎn)化效率。

【作者單位】：
【關(guān)鍵詞】：
【分類號(hào)】：S641.3
【正文快照】：

病原物誘導(dǎo)表達(dá)的Rs-AFP2基因轉(zhuǎn)化辣椒研究@朱昌叁$廣東省湛江師范學(xué)院自然科學(xué)與技術(shù)研究中心!湛江,524048廣東省廣東海洋大學(xué)農(nóng)業(yè)生物技術(shù)研究所,湛江,524088 @羅齊軍$廣東省湛江師范學(xué)院自然科學(xué)與技術(shù)研究中心!湛江,524048 @胡木林$廣東省湛江師范學(xué)院自然科學(xué)與技術(shù)

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