發(fā)布時(shí)間：2017-10-06 05:29

  本文關(guān)鍵詞：含S-S聚合物的設(shè)計(jì)、合成及基因轉(zhuǎn)染性能研究

  更多相關(guān)文章： 基因運(yùn)送 聚(β-氨基酯) 聚乙烯亞胺 二硫鍵

【摘要】：作為病毒載體的替代品,陽離子聚合物型基因載體在基因治療方面顯現(xiàn)出了很大的潛力,它可以與特定基因結(jié)合形成基因復(fù)合物,在內(nèi)吞作用下進(jìn)入細(xì)胞從而實(shí)現(xiàn)基因運(yùn)送。在本論文中,我們設(shè)計(jì)了兩種陽離子聚合物型基因載體：含二硫鍵的聚(p-氨基酯)(PBAE)和羥基化聚乙烯亞胺(PEI)。二硫鍵在細(xì)胞外相對穩(wěn)定,而在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)由于存在較高濃度的谷胱甘肽,二硫鍵能夠快速的裂開表現(xiàn)出一種響應(yīng)機(jī)制。據(jù)此我們在設(shè)計(jì)聚(β-氨基酯)時(shí),首先將二硫鍵引入雙丙烯酸酯單體中,然后通過其與氨基醇的交聯(lián),制備出64種含有二硫鍵的聚(p-氨基酯)。在進(jìn)行了基因轉(zhuǎn)染和細(xì)胞毒性等相關(guān)實(shí)驗(yàn)后,我們篩選出四個轉(zhuǎn)染表現(xiàn)很好的樣品：SF7-1、SF7-2、SF7-3和SF7-4。結(jié)果顯示,在A549細(xì)胞中和COS7細(xì)胞中,它們的最高轉(zhuǎn)染效率分別達(dá)到48%、43%、52%、47%和56%、60%、52%、49%,與對照樣品PEI 25kDa相比,它們在擁有較高轉(zhuǎn)染效率的同時(shí)具有較低的細(xì)胞毒性,在基因運(yùn)送方面具有很好的應(yīng)用前景。聚乙烯亞胺是目前最有效的陽離子非病毒基因載體之一,通常情況下,分子量較大的PEI的基因轉(zhuǎn)染效率相對較高,但與此同時(shí)它的細(xì)胞毒性也會隨之增大,在一定程度上限制PEI作為基因運(yùn)送載體的應(yīng)用。在本論文中我們將不同比例的N-(2-羥乙基)丙烯酰胺修飾到PEI1800上實(shí)現(xiàn)PEI羥基化,然后將羥基化的PEI1800與具有生物降解性的交聯(lián)劑N,N'-雙(丙烯酰)胱胺反應(yīng),實(shí)現(xiàn)兩者的交聯(lián)聚合,制備得到一系列羥基化的PEI聚合物。其中的P5、P8、P11和P18具有很好的轉(zhuǎn)染表現(xiàn),在A549細(xì)胞中和COS7細(xì)胞中,它們的最高轉(zhuǎn)染效率分別達(dá)到35%、42%、40%、36%和39%、42%、49%、37%。我們發(fā)現(xiàn)其中修飾20%比例羥基的P8和P11轉(zhuǎn)染效率最有優(yōu)勢,可見在PEI中引入適量羥基對提高其轉(zhuǎn)染效率能夠起到積極作用。
【關(guān)鍵詞】：基因運(yùn)送 聚(β-氨基酯) 聚乙烯亞胺 二硫鍵
【學(xué)位授予單位】：南京理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：O631
【目錄】：

• 摘要5-6
• Abstract6-9
• 1 緒論9-19
• 1.1 陽離子聚合物基因轉(zhuǎn)染載體9-14
• 1.1.1 聚(β-氨基酯) (PBAE)10
• 1.1.2 聚乙烯亞胺(PEI)10-12
• 1.1.3 聚賴氨酸(PLL)12-13
• 1.1.4 其他陽離子聚合物13-14
• 1.2 陽離子聚合物的基因轉(zhuǎn)染機(jī)理14-16
• 1.2.1 細(xì)胞吸收14-15
• 1.2.2 脫離內(nèi)涵體15
• 1.2.3 質(zhì)粒DNA的解離15-16
• 1.2.4 質(zhì)粒DNA進(jìn)入細(xì)胞核16
• 1.3 聚合物基因載體發(fā)展的障礙及發(fā)展前景16-17
• 1.4 研究內(nèi)容17-19
• 2 含二硫鍵的聚(B-氨基酯)基因載體的合成以及性能研究19-35
• 2.1 儀器與試劑19-20
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器19
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑19-20
• 2.2 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容20-22
• 2.2.1 含二硫鍵的丙烯酸酯單體S的合成20
• 2.2.2 丙烯酸酯封端的聚(β-氨基酯)的合成20-21
• 2.2.3 小分子胺封端的聚(β-氨基酯)的合成21-22
• 2.3 聚合物作為質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染載體的性能研究22-25
• 2.3.1 實(shí)驗(yàn)材料22-23
• 2.3.2 實(shí)驗(yàn)方法23-25
• 2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論25-33
• 2.4.1 含二硫鍵的聚(β-氨基酯)聚合物的合成25-28
• 2.4.2 聚(β-氨基酯)作為基因載體的性能研究28-33
• 2.5 本章小結(jié)33-35
• 3 PEI衍生物基因載體的合成以及性能研究35-48
• 3.1 儀器與試劑35-36
• 3.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器35
• 3.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑35-36
• 3.2 PEI衍生物的合成36-39
• 3.2.1 N,N'-雙(丙烯酰)胱胺(CBA)交聯(lián)劑的合成36
• 3.2.2 PEI的羥基化修飾36-37
• 3.2.3 PEI聚合物的合成37-39
• 3.3 聚合物作為質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染載體的性能研究39-40
• 3.3.1 實(shí)驗(yàn)材料39
• 3.3.2 實(shí)驗(yàn)方法39-40
• 3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論40-46
• 3.4.1 PEI聚合物的合成40-42
• 3.4.2 PEI聚合物作為基因載體的性能研究42-46
• 3.5 本章小結(jié)46-48
• 4 結(jié)論48-49
• 致謝49-50
• 參考文獻(xiàn)50-60
• 附錄60

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