本文關(guān)鍵詞：基于光鑷?yán)庾V技術(shù)的葡萄球菌黃素生物合成的研究

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【摘要】：金黃色葡萄球菌在臨床上是極為重要的病原菌,耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)造成的感染成為與乙型肝炎,艾滋病并列的世界三大感染頑疾。典型的金黃色葡萄球菌在顯微鏡下呈球型,葡萄串狀排列,因此被稱(chēng)為葡萄球菌。同時(shí),由于它能產(chǎn)生一種金黃色的類(lèi)胡蘿卜素而獲得了金黃色葡萄球菌的名稱(chēng)。這種金黃色的類(lèi)胡蘿卜素的色素(Staphyloxanthin)增強(qiáng)了細(xì)菌對(duì)氧化脅迫和對(duì)宿主嗜中性粒細(xì)胞吞噬的抵抗能力,可以幫助細(xì)菌逃避宿主的免疫系統(tǒng),與細(xì)菌的毒力有著密切的聯(lián)系,因此阻斷葡萄球菌黃素生物合成有望成為一種新的治療MRSA感染的有效手段。高效準(zhǔn)確測(cè)定金葡菌內(nèi)葡萄球菌黃素是理解其致毒機(jī)理、生物合成及新型抗生素篩選的前提條件,傳統(tǒng)的基于溶劑提取的定量方法操作較為繁瑣且使用有毒的甲醇。光鑷?yán)庾V技術(shù)(Laser tweezers Raman spectroscopy, LTRS)將光鑷技術(shù)和拉曼光譜技術(shù)結(jié)合起來(lái),利用高度匯聚的激光束,囚禁溶液中的活細(xì)胞,再通過(guò)瞬時(shí)加大囚禁細(xì)胞的光束激發(fā)細(xì)胞內(nèi)分子的拉曼散射。該技術(shù)充分結(jié)合了共焦顯微、光鑷、拉曼光譜的優(yōu)點(diǎn),提高了檢測(cè)的靈敏度、準(zhǔn)確度,是研究生理狀態(tài)下單個(gè)活細(xì)胞內(nèi)化學(xué)物質(zhì)含量及結(jié)構(gòu)變化的有力工具。為此,本文以利用光鑷?yán)庾V原位測(cè)定金葡菌活細(xì)胞內(nèi)葡萄球菌黃素的方法,并以此手段深入研究環(huán)境因素及生長(zhǎng)條件對(duì)葡萄球菌黃素生物合成的影響,了解菌體色素含量與會(huì)葡菌抵抗氧化脅迫能力的關(guān)系。本論文主要研究?jī)?nèi)容包括以下幾點(diǎn)：1.利用LTRS研究不同環(huán)境因素和生長(zhǎng)條件對(duì)金葡菌內(nèi)葡萄球菌黃素生物合成的影響,如外界溫度、pH值、不同葡萄糖濃度、不同氮源等的影響；研究一個(gè)生長(zhǎng)周期內(nèi)(接種0-24 h)內(nèi)金葡菌細(xì)胞內(nèi)積累的葡萄球菌黃素含量的漲落規(guī)律。2.探索LTRS技術(shù)用于篩選和評(píng)價(jià)葡萄球菌黃素合成抑制藥物的可行性,選擇目前已經(jīng)為文獻(xiàn)證實(shí)有葡萄球菌黃素合成抑制活性的藥物,研究不同黃酮濃度與金葡菌內(nèi)葡萄球菌黃素累積濃度間是否存在負(fù)相關(guān)關(guān)系,即量效關(guān)系。3.利用LTRS研究葡萄球菌黃素對(duì)金葡菌的抗氧化保護(hù)作用,對(duì)同一菌株加入不同濃度的色素合成抑制劑使得菌體內(nèi)積累的色素含量不同,用LTRS定量菌體細(xì)胞內(nèi)葡萄球菌黃素含量,并比較不同色素含量的金葡菌對(duì)H202、單線(xiàn)態(tài)氧等活性氧的耐受性,評(píng)價(jià)葡萄球菌黃素含量與金葡菌在氧脅迫條件下存活率的相關(guān)性。
【關(guān)鍵詞】：金黃色葡萄球菌 葡萄球菌黃素 光鑷?yán)庾V技術(shù) 毒力因子 抗生素
【學(xué)位授予單位】：廣西師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R446.5;O657.37
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 一、引言10-12
• 二、光鑷?yán)庾V技術(shù)的簡(jiǎn)述12-19
• 2.1 拉曼光譜的歷史和發(fā)展12
• 2.2 拉曼光譜原理12-13
• 2.3 拉曼光譜優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)13-14
• 2.4 光鑷技術(shù)的原理14-15
• 2.5 激光鑷子拉曼光譜系統(tǒng)15-17
• 2.6 LTRS在微生物學(xué)中的應(yīng)用17-19
• 三、葡萄球菌黃素19-23
• 3.1 金黃葡萄球菌的發(fā)現(xiàn)和危害19
• 3.2 葡萄球菌黃素的合成19-21
• 3.3 葡萄球菌黃素的作用21
• 3.4 葡萄球菌黃素測(cè)量的研究進(jìn)展21-23
• 四、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備工作23-27
• 4.1 試劑23-24
• 4.2 菌株24
• 4.3 儀器24
• 4.4 培養(yǎng)基24-25
• 4.5 實(shí)驗(yàn)配制溶液25-27
• 五、實(shí)驗(yàn)方法27-30
• 5.1 金葡菌的保存、活化和培養(yǎng)27
• 5.1.1 金葡菌的保存27
• 5.1.2 金葡菌的活化27
• 5.1.3 金葡菌的培養(yǎng)27
• 5.2 金葡菌生長(zhǎng)曲線(xiàn)的測(cè)定27-28
• 5.3 LTRS法對(duì)金葡菌的測(cè)定28
• 5.4 H_2O_2處理后金葡菌平板菌落計(jì)數(shù)28-29
• 5.5 亞甲藍(lán)處理后金葡菌平板菌落計(jì)數(shù)29-30
• 六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析30-44
• 6.1 金黃色葡萄球菌的拉曼光譜和生長(zhǎng)曲線(xiàn)分析30-33
• 6.2 LTRS法研究不同環(huán)境因素和生長(zhǎng)條件對(duì)金葡菌內(nèi)色素生物合成的影響33-37
• 6.2.1 不同PH值條件下金葡菌拉曼光譜分析34
• 6.2.2 不同溫度條件下金葡菌拉曼光譜分析34-35
• 6.2.3 不同葡萄糖濃度條件下金葡菌拉曼光譜分析35-36
• 6.2.4 不同氮源條件下金葡菌拉曼光譜分析36-37
• 6.2.5 結(jié)論37
• 6.3 利用LTRS研究黃酮對(duì)葡萄球菌黃素生物合成的抑制作用37-39
• 6.4 利用LTRS研究葡萄球菌黃素對(duì)金葡菌的抗氧化保護(hù)作用39-44
• 6.4.1 葡萄球菌黃素對(duì)H_2O_2的抗氧化保護(hù)作用40-41
• 6.4.2 葡萄球菌黃素對(duì)單線(xiàn)態(tài)氧的抗氧化保護(hù)作用41-42
• 6.4.3 結(jié)論42-44
• 七、總結(jié)44-45
• 參考文獻(xiàn)45-49
• 攻讀碩士學(xué)位期間完成的論文以及參與的課題49-50
• 致謝50-52

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