本文關(guān)鍵詞：殼寡糖的制備、分離純化及生物活性研究

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【摘要】：殼聚糖來(lái)源于蝦、蟹殼,是甲殼素脫乙�；漠a(chǎn)物,由一定比例的氨基葡萄糖和N-乙酰氨基葡萄糖經(jīng)β-(1,4)糖苷鍵連接而成,分子量大且不溶于水,限制了其在多方面的應(yīng)用。殼寡糖是殼聚糖的降解產(chǎn)物,分子量小,水溶性好,易被人體吸收,與殼聚糖相比具有更顯著的生物活性。然而由于高純度的殼寡糖單體難以制備,以往的研究中均采用殼寡糖混合物進(jìn)行生物活性評(píng)價(jià),這限制了其生物活性機(jī)理的深入研究。因此,特定聚合度殼寡糖的制備及其生物活性研究對(duì)于深入開(kāi)發(fā)利用殼寡糖是非常必要的。本文采用酶解法制備殼寡糖,并采用凝膠色譜法對(duì)殼寡糖進(jìn)行分離純化獲得了單一聚合度殼寡糖,并在此基礎(chǔ)上對(duì)其體內(nèi)降血脂和體外抗氧化活性進(jìn)行了研究。論文的主要研究結(jié)果如下:(1)殼寡糖的制備:以殼聚糖為原料,還原糖得率為指標(biāo),采用單因素和正交試驗(yàn)優(yōu)化了殼聚糖酶解制備殼寡糖的工藝條件,并對(duì)正交優(yōu)化條件下制備的殼寡糖的分子量、組成和各組分含量等進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果表明,殼寡糖的最佳水解條件是:溫度為50℃,pH為5.6,加酶量為58 U?g-1,底物濃度為3.0%,反應(yīng)時(shí)間為4.0 h。該條件下降解制備殼寡糖,乙酰丙酮法測(cè)得其數(shù)均分子量為1457 Da,DNS法測(cè)得其含量為96.5%,TLC和HPLC法測(cè)得其含有氨基葡萄糖,殼2糖,殼3糖,殼4糖和殼5糖,其中,以殼3糖和殼4糖為主。HPLC法定量結(jié)果表明,氨基葡萄糖、殼2糖、殼3糖、殼4糖、殼5糖含量分別為1.24%、12.83%、40.42%、33.04%和12.46%。(2)殼寡糖的分離純化:采用凝膠色譜法對(duì)殼寡糖進(jìn)行分離純化,固定柱床體積340 mL(2.0×110 cm),考察了上樣量和洗脫流速,確定最適上樣量為0.10 g,流速為0.20 mL?min-1。此條件下分離純化得到四個(gè)殼寡糖單體:殼2糖、殼3糖、殼4糖和殼5糖。HPLC法檢測(cè)其純度分別為95.7%,97.1%,97.7%和89.4%。(3)殼寡糖體內(nèi)降血脂活性:殼寡糖數(shù)均分子量為1457 Da,聚合度為1~5,含量為96.5%。通過(guò)飼喂高脂飼料構(gòu)建高血脂SD大鼠模型,灌胃給藥6周后,測(cè)定高(375 mg?kg-1?d-1)、中(187.5 mg?kg-1?d-1)、低(93.75 mg?kg-1?d-1)劑量組的降血脂作用效果。結(jié)果表明,殼寡糖高、中劑量組均能顯著降低血清中TC、TG和LDL-C水平,升高HDL-C水平,表明殼寡糖具有良好的降血脂活性。此外殼寡糖高、中劑量組均能顯著升高肝臟中脂蛋白酯酶和肝脂酶活性,降低肝系數(shù),改善脂肪肝癥狀,說(shuō)明殼寡糖具有很好的保肝護(hù)肝作用。且殼寡糖還能使血清中SOD和GSH-Px活力顯著升高,MDA顯著減少,表明殼寡糖還能夠增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化活性。(4)殼2~5糖單體的體外降血脂和抗氧化活性:選用人肝癌細(xì)胞HepG2作為研究對(duì)象,用20μg?mL-1膽固醇構(gòu)建高膽固醇模型和50%血清構(gòu)建高甘油三酯模型,研究不同濃度殼2~5糖對(duì)細(xì)胞內(nèi)膽固醇和甘油三酯的影響。結(jié)果表明,隨著聚合度的增大,其降低膽固醇和甘油三酯的作用逐漸減弱,即殼2糖殼3糖殼4糖殼5糖。對(duì)DPPH和超氧陰離子的清除實(shí)驗(yàn)表明,其清除作用隨聚合度增大而增大。對(duì)?OH的清除作用則相反。綜上,本文對(duì)殼寡糖的制備、分離純化及體內(nèi)體外降血脂和抗氧化活性進(jìn)行了研究,為殼寡糖功能產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)奠定了基礎(chǔ),也為殼寡糖的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。
【關(guān)鍵詞】：殼寡糖 分離純化 降血脂活性 抗氧化活性
【學(xué)位授予單位】：華僑大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：O636.1
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-10
• 第1章 引言10-22
• 1.1 殼寡糖概述10-11
• 1.2 殼寡糖的制備與檢測(cè)方法11-15
• 1.2.1 殼寡糖的制備11-13
• 1.2.2 殼寡糖的檢測(cè)13-15
• 1.3 殼寡糖單體15-17
• 1.3.1 殼寡糖單體的制備15-16
• 1.3.2 殼寡糖單體活性的研究16-17
• 1.4 殼寡糖的應(yīng)用17-19
• 1.4.1 殼寡糖在生物醫(yī)藥領(lǐng)域中的應(yīng)用17-18
• 1.4.2 殼寡糖在農(nóng)業(yè)領(lǐng)域中的應(yīng)用18
• 1.4.3 殼寡糖在精細(xì)化工領(lǐng)域中的應(yīng)用18-19
• 1.5 本論文研究意義、目標(biāo)和內(nèi)容19-22
• 1.5.1 本論文研究的意義19
• 1.5.2 本論文的研究目標(biāo)19-20
• 1.5.3 本論文的研究?jī)?nèi)容20-22
• 第2章 殼寡糖的制備與表征22-40
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器22-24
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料22-23
• 2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器23-24
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法24-28
• 2.2.1 殼聚糖酶解制備殼寡糖條件的確定24
• 2.2.2 正交試驗(yàn)24-25
• 2.2.3 殼寡糖的制備25
• 2.2.4 殼寡糖的檢測(cè)25-28
• 2.3 結(jié)果與討論28-39
• 2.3.1 殼聚糖酶解制備殼寡糖條件的確定28-32
• 2.3.2 正交試驗(yàn)32-33
• 2.3.3 殼寡糖的檢測(cè)33-36
• 2.3.4 殼寡糖的定量分析36-39
• 2.4 本章小結(jié)39-40
• 第3章 殼寡糖的分離純化及檢測(cè)40-50
• 3.1 材料與儀器40-41
• 3.1.1 材料與試劑40-41
• 3.1.2 儀器與設(shè)備41
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法41-42
• 3.2.1 殼寡糖的分離與純化步驟41-42
• 3.2.2 殼寡糖分離純化條件的考察42
• 3.2.3 殼寡糖單體的檢測(cè)42
• 3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析42-48
• 3.3.1 殼寡糖的分離42-45
• 3.3.2 殼寡糖單體純度的檢測(cè)45-47
• 3.3.3 討論47-48
• 3.4 本章小結(jié)48-50
• 第4章 殼寡糖體內(nèi)降血脂實(shí)驗(yàn)研究50-60
• 4.1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器50-52
• 4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料50-51
• 4.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器51-52
• 4.2 實(shí)驗(yàn)方法52-53
• 4.2.1 高脂飼料52
• 4.2.2 高脂血癥模型的建立52
• 4.2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的分組52-53
• 4.2.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析53
• 4.3 結(jié)果與討論53-58
• 4.3.1 殼寡糖對(duì)大鼠血清血脂水平的影響53-54
• 4.3.2 殼寡糖對(duì)大鼠肝脂水平的影響54-55
• 4.3.3 殼寡糖對(duì)大鼠肝指標(biāo)的影響55
• 4.3.4 殼寡糖對(duì)大鼠抗氧化活性的影響55-56
• 4.3.5 殼寡糖對(duì)大鼠肝臟病理形態(tài)的影響56-58
• 4.4 本章小結(jié)58-60
• 第5章 殼寡糖單體體外降血脂和抗氧化實(shí)驗(yàn)研究60-76
• 5.1 材料與儀器60-63
• 5.1.1 實(shí)驗(yàn)材料60-61
• 5.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器61-62
• 5.1.3 主要試劑的配制62-63
• 5.2 實(shí)驗(yàn)方法63-66
• 5.2.1 殼寡糖單體體外降血脂活性的測(cè)定63-65
• 5.2.2 殼寡糖單體體外抗氧化活性的測(cè)定65-66
• 5.3 結(jié)果與分析66-73
• 5.3.1 體外降血脂活性66-71
• 5.3.2 體外抗氧化活性71-73
• 5.4 本章小結(jié)73-76
• 第6章 結(jié)論與展望76-78
• 6.1 結(jié)論76-77
• 6.2 展望77-78
• 參考文獻(xiàn)78-86
• 致謝86-88
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷、在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及研究成果88

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本文編號(hào)：964206